N6-甲基腺苷(m6A)是真核生物RNA分子中極為常見和豐富的修飾。由甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物METTL3催化m6A修飾，并通過M6A RNA去甲基化酶FTO和ALKBH5，以α-酮戊二酸(α-KG)-和Fe2+-依賴的方式催化M6A去甲基化。METTL3、FTO和ALKBH5在許多生物中起著重要作用，從發(fā)育和代謝到生育的過程。在所有RNA堿基甲基化中，m6A占80%以上，存在于各種物種中。m6A主要分布在mRNA中同樣也發(fā)生在非編碼RNA中，如tRNA、rRNA和snRNA。在mRNA轉(zhuǎn)錄物中m6A的相對豐度已被證明影響RNA代謝過程，如剪接，核輸出，翻譯能力和穩(wěn)定性，以及RNA轉(zhuǎn)錄。由m6A RNA甲基酶和脫甲基酶缺陷引起的m6A甲基化水平異常可能導(dǎo)致RNA功能障礙并引起疾病。

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例如，由于FTO突變患者的FTO活性增加，靶m RNA中m6A的異常低水平，通過一種未定義的途徑，導(dǎo)致肥胖和相關(guān)疾病的發(fā)生。對RNA的化學(xué)M6A修飾的動態(tài)性和可逆性，也可作為一種具有深遠生物學(xué)意義的新表觀遺傳標(biāo)記。因此，更多有用的信息，以更好地理解m6A RNA甲基氧化RNA?轉(zhuǎn)錄物的水平和分布有利于疾病的診斷和治療。

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目前，有幾種方法被用于表位范圍的m6A映射。這些方法包括MeRIP，PA-m6A-seq，miCLIP和m6A-CLIP。MeRIP已被廣泛應(yīng)用，但在m6A分析中無法實現(xiàn)高分辨率。PA-m6A-seq、mi CLIP和m6A-CLIP提高了分析分辨率，但由于重復(fù)性差和工藝復(fù)雜。特別是，這些方法耗時（>2天）和費用昂貴。為了解決這些問題，m6A RNA甲基化片段富集試劑盒來了~

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艾美捷m6A-RNA甲基化片段富集試劑盒【簡稱：MeRIP試劑盒】有以下特點：

1、高度富集：使用RNA?切割酶混合物同時對含有m6A?的目標(biāo)序列兩端的RNA?進行片段化和切割/移除任何RNA?序列，而不影響被抗體占據(jù)的RNA?區(qū)域。短片段RNA?僅與抗m6A?抗體結(jié)合。因此，非?？煽康卮_定真正的m6A?富集目標(biāo)區(qū)域，并可實現(xiàn)高分辨率繪圖。

2、低輸入：不結(jié)合的RNA?切割和免疫捕獲是在同一個單管中處理的，這樣可最大限度地保護含有m6A的目標(biāo)區(qū)域，并最小化樣本損失，允許輸入RNA?低至500ng。

3、極小背景：在含m6A?目標(biāo)序列的兩(2)端切割非結(jié)合RNA?序列，可最小化MeRIP/測序背景，允許1000萬讀的數(shù)據(jù)分析。

4、超快速、精簡程序：?從RNA?到cDNA?文庫的過程小于3?小時，動手時間<30?分鐘。

5、超級方便：?本試劑盒包含了每一步所需的所有組件，這足以捕獲含m6A?的RNA?序列，從而允許以一種很方便的方法來富集，結(jié)果可靠一致。

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m6A-RNA甲基化片段富集試劑盒檢測原則和程序：

EpiQuik??CUT&RUN m6A RNA富集（MeRIP）試劑盒包含所需的所有必要試劑用于從總RNA開始成功地進行m6A RNA富集。在反應(yīng)中，RNA切割/去除包含靶m6A的區(qū)域兩端的序列

使用珠結(jié)合的m6A捕獲抗體將含有m6A的片段下拉。富集的然后釋放、純化和洗脫RNA。試劑盒中包括非免疫IgG對照和m6A陽性對照。這些可用于證明試劑盒的功效和富集RNA定量或生物分析儀步驟。

圖1：使用EpiQuik富集m6A RNA? 切割并運行m6A RNA富集（MeRIP）試劑盒：捕獲含有m6A的RNA片段通過抗m6A抗體（#A-1801，EpigenTek）從10μg人RNA和500ng陽性對照寡核苷酸。非免疫IgG用作陰性對照。富集的RNA是純化并熒光定量用于富集倍數(shù)比較。

圖2：文庫片段的大小分布：m6A片段富集通過抗m6A抗體（#A-1801，EpigenTek）并用于cDNA文庫制備。峰值195 bps反映m6A抗體結(jié)合的RNA插入大?。s55個基點）