羅丹明B標(biāo)記鏈霉親和素，關(guān)于羅丹明B可用于熒光探針的制備

今天小編整理并分享關(guān)于羅丹明B可用于熒光探針的制備：

羅丹明B常用于蛋白標(biāo)記，例如羅丹明B標(biāo)記鏈霉親和素，熒光標(biāo)記的生物分子可廣泛用于生命科學(xué)研究和疾病診斷領(lǐng)域。相關(guān)文獻(xiàn)提到:

通過Stober方法將羅丹明B分子通過共價(jià)結(jié)合的方式成功地包覆在二氧化硅納米粒子中,制備的熒光硅納米粒子具有很好的水溶性、成像穩(wěn)定性以及生物兼容性,其粒子大小約為60nm。熒光強(qiáng)度和羅丹明B分子相比提高了4000倍。對(duì)制備的熒光硅納米粒子進(jìn)一步進(jìn)行了氨基、羧基及鏈霉親和素的修飾,成功研制了可特異性結(jié)合生物素修飾蛋白質(zhì)的納米熒光檢測(cè)探針。

制備過程：

熒光硅納米粒子依據(jù)Stober法制備：

?

50 mL的圓底燒瓶用8%的氫氟酸浸泡30 min，用洗滌液洗滌，自來(lái)水沖洗，二次水蕩洗，烘干，干燥器中冷卻;圓底燒瓶中加入溶解了RITC (5.36 mg，0.01 mol)以及APTS (13.6 uL，0.08 mmol)的絕對(duì)乙醇(800 uL)并攪拌反應(yīng)。20 h后氨水（25%，2 mL)與30 mL乙醇加入到混合液中室溫下攪拌。20 h后加入 TEOS (0.558 mL，2.5 mmol）到混合液中，攪拌條件下在暗處反應(yīng)20 h。最后，加入TEOS (13.8 uL，0.062 mmol)并反應(yīng)5h。再經(jīng)15000 rpm高速離心，并用70%乙醇和去離子水洗滌。將制得的納米粒子轉(zhuǎn)移至表面皿，烘干后保存。

熒光硅納米粒子的表面修飾：

將制得的SiNPs納米粒子超聲分散在5 mL，1 mM的乙酸中，加入50 mLAPTS和150 mL THPMP，在室溫下?lián)u床反應(yīng)3 h。多余反應(yīng)物離心去除，氨基修飾的SiNPs用去離子水洗三次后超聲分散在包含58 mg 的 5 mL DMF中，過夜攪拌，然后15000 rpm離心洗滌并用DMF和去離子水各洗3次，則得到羧基修飾的SiNPs。干燥后2 mg羧基修飾的SiNPs溶解在包含MES （0.1 M)，NHS ( 10 mM)以及EDC ( 10 mM）的混合液中，37℃條件下活化1.5 h，并用PBS 溶液離心洗滌3次。最終制得的表面羧基改性的SiNPs溶解在2 mL PBS中，加入鏈霉親和素SA （100 uL，1 mg/mL)室溫下?lián)u床反應(yīng)4h并保存于4℃環(huán)境下過夜。離心洗滌反應(yīng)混合液除去過量的親和素，SA-NPs溶解在 PBS溶液中4℃保存。

結(jié)論：

將熒光硅納米粒子這一新型探針用來(lái)檢測(cè)反向蛋白質(zhì)微陣列芯片。通過Stober方法將羅丹明B分子通過共價(jià)結(jié)合的方式成功地被包覆在二氧化硅納米粒子中，制備的納米粒子具有很好的水溶性、成像穩(wěn)定性以及生物兼容性，其粒子大小約為60 nm，熒光強(qiáng)度和單個(gè)羅丹明B分子相比提高了4000倍。對(duì)此熒光硅納米粒子進(jìn)一步進(jìn)行了氨基、羧基及鏈霉親和素修飾，成功制備了可特異性結(jié)合生物素修飾蛋白質(zhì)的納米熒光檢測(cè)探針。

桃葉珊瑚苷修飾牛血清白蛋白

以上來(lái)源于文獻(xiàn)整理，如有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系刪除，RL2023.9。