? ? 大家好，今天跟大家分享一篇近期在Anal Chem上發(fā)表的Technical note文章，文章的題目為：“On-MALDI-Target N?Glycan Nonreductive Amination by 2?Aminobenzoic Acid”。論文的通訊作者是Biogen公司的Xiaoping L Hronowski。

? ? 作為最常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一，在哺乳動物中有超過50%的蛋白是糖基化修飾的。蛋白質(zhì)的糖基化修飾具有非常重要的生物學(xué)作用，比如信號識別、免疫、病毒感染等。異常的糖基化會引起生物功能的改變，例如癌癥、免疫功能缺陷和神經(jīng)退行性疾病等。為了理解蛋白糖基化和疾病之間的相關(guān)性，有必要使用靈敏的分析工具來分析糖蛋白的糖基化或確證特定生物途徑中糖基化的改變。經(jīng)過幾十年的發(fā)展，已經(jīng)有多種技術(shù)用于蛋白糖基化聚糖的分析，例如ESI-MS、MALDI-MS、CE-MS等。由于聚糖親水性在質(zhì)譜檢測時存在低的離子化效率，并且聚糖自身無在外或熒光基團，無法用紫外或熒光檢測。為了解決這些問題，常用的方法是對聚糖進行衍生化之后再進行檢測，2-Aminobenzoic acid (2-AA)、2-aminobenzamide (2-AB),?和普魯卡因胺是最常見的衍生試劑。

? ? MALDI-MS因其方便快捷高靈敏的特點廣泛應(yīng)用于蛋白糖基化聚糖的分析。并發(fā)展了使用3-aminoquinoline進行靶上衍生并作為基質(zhì)的聚糖檢測方法。本文通過使用2-AA作為靶上衍生試劑及基質(zhì)對聚糖進行分析表征，避免了復(fù)雜的樣品制備過程，并減少了樣品的損失（圖1）。

? ? 首先，作者使用高唾液酸化的A3G3S3聚糖對該靶上衍生方法進行了驗證，發(fā)現(xiàn)在反應(yīng)溶液中加入2%-2.5%的甲酸即可以將聚糖幾乎完全衍生化。作者使用Fetuin蛋白聚糖對方法進行了表征，并將靶上2-AA非還原胺化衍生聚糖與還原胺化2-AA衍生聚糖進行靈敏度比較（圖2）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，靶上2-AA非還原胺化衍生比還原胺化2-AA衍生的信號提高了約300倍。并且2-AA非還原胺化得到的糖峰為[M+119-H]?，而2-AA還原胺化得到的糖峰信號為[M+121-H]?，確定了2-AA非還原胺化可以實現(xiàn)。

? ? 最后，作者使用該方法對自己公司的單克隆抗體進行了表征，發(fā)現(xiàn)靶上2-AA非還原胺化衍生方法與LC-FLR-MS的結(jié)果比較吻合（圖3）。作者特別提到的是，聚糖酶切后的脫鹽對于靶上2-AA非還原胺化是非常重要的，這可以避免鹽和雜質(zhì)對衍生化產(chǎn)生干擾，并減少質(zhì)譜的離子抑制。

原文鏈接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.0c01748