MycoGenie支原體消除試劑盒實(shí)驗(yàn)方案及故障排除
MycoGenie?支原體消除試劑盒旨在從受污染的細(xì)胞培養(yǎng)基和血清中消除支原體。
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與用于治療支原體污染的傳統(tǒng)抗生素不同,該試劑盒通過破壞膜結(jié)構(gòu)來去除支原體,甚至可以消除抗生素耐藥支原體。與其他僅抑制增殖的常用方法相比,這是一種更有效的消除支原體的方法。它在去除革蘭氏陰性和陽性細(xì)菌方面也非常有效。該試劑盒在3-7天的治療方案后成功消除了細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外支原體。此外,它對(duì)細(xì)胞無毒,已被證明可以殺死大多數(shù)支原體物種。MycoGenie?支原體消除試劑盒已通過最常用的細(xì)胞系驗(yàn)證,包括小鼠和人類胚胎干細(xì)胞、iPS細(xì)胞、HEK293、Hela、HepG2、HCT116、COS-7、Vero、Huh-7、MDCK、PANC-1、SW620?和?U2OS。
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圖1:支原體消除試劑盒?-?無毒:用支原體消除試劑 (3:1) 培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞 (ES)?1000?天,對(duì)細(xì)胞毒性沒有影響。
圖2:支原體消除試劑盒?-?消除支原體:ES?培養(yǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)物沒有檢測(cè)到支原體,使用支原體檢測(cè)試劑盒 (Cat.no?進(jìn)行測(cè)試。MORV0011)用支原體消除試劑處理后3天。試管?1:陽性對(duì)照?|第?2?期:第?0?天?|第?3?期:第?3?天?|管4:陰性對(duì)照。
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支原體消除試劑盒實(shí)驗(yàn)方案:
1.通過用比例為1:1000的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋MycoGenie MycoPlasma消除試劑來創(chuàng)建工作溶液。
注意:稀釋的溶液應(yīng)肉體制備,不應(yīng)儲(chǔ)存。
2.丟棄受污染的細(xì)胞培養(yǎng)基,并加入含有步驟1中制備的MycoGenie MycoPlasma消除溶液的新鮮培養(yǎng)基。
注意:在治療過程中,對(duì)于每個(gè)培養(yǎng)基更換步驟,使用含有MycoGenie支原體消除試劑的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基。
注意:更換細(xì)胞培養(yǎng)基時(shí)收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液,并使用MycoGenie快速支原體檢測(cè)試劑盒(測(cè)定精靈貓。MORV0011)檢測(cè)支原體污染。
3.支原體的成功去除通??梢栽?3?天內(nèi)獲得。
注意:3天的治療意味著每天更換細(xì)胞培養(yǎng)基3天。
注意:根據(jù)污染程度調(diào)整處理持續(xù)時(shí)間。
4.使用霉菌精快速支原體檢測(cè)試劑盒(檢測(cè)精靈貓。MORV0011)確認(rèn)治療后支原體已被完全切除。
5.確認(rèn)支原體去除后,更換為不含支原體消除溶液的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基。確認(rèn)支原體去除后,用不含支原體消除試劑盒的新鮮培養(yǎng)基替換。
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故障?排除
1.?支原體嚴(yán)重污染的細(xì)胞如何治療?
對(duì)于嚴(yán)重污染的培養(yǎng)物,建議將治療延長(zhǎng)至7天甚至更長(zhǎng)時(shí)間。
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2.?支原體消除試劑對(duì)細(xì)胞有毒嗎?
在驗(yàn)證過程中,已經(jīng)表明MycoGenie MycoPlasma消除試劑盒對(duì)大多數(shù)細(xì)胞類型無毒。但是,如果在處理過程中細(xì)胞生長(zhǎng)減少,建議將稀釋因子從1:1000增加到1:2000甚至更高。
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3. MycoGenie?支原體消除試劑盒可以與原代細(xì)胞培養(yǎng)一起使用嗎?
是的。與其他資源的同類產(chǎn)品相比,MycoGenie?支原體消除試劑盒證明,在從?MEF(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)和其他原代細(xì)胞培養(yǎng)物中消除支原體的效率更高,這些原代細(xì)胞具有支原體污染的高風(fēng)險(xiǎn)。