ZL-620I醫(yī)學(xué)信號(hào)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)觀察腎上腺素、乙酰膽堿和垂體后葉素對(duì)冠脈流量的影響
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>
學(xué)習(xí)用Langendorff法灌流離體大鼠心臟。
實(shí)習(xí)離體灌注大鼠心臟冠脈流量的測(cè)定。
觀察腎上腺素、乙酰膽堿和垂體后葉素對(duì)冠脈流量的影響。
【實(shí)驗(yàn)原理】
把心臟從動(dòng)物體摘取之后，以具有壓力、溫度（37℃）并充氧的克氏液經(jīng)主動(dòng)脈根部逆行灌流。灌流液經(jīng)冠狀動(dòng)脈口進(jìn)入冠狀血管營(yíng)養(yǎng)心臟，以維持心臟的正?；顒?dòng)。灌流液經(jīng)冠狀血管流入右心房，然后由腔靜脈口及肺動(dòng)脈口流出，在單位時(shí)間內(nèi)的流出量即為冠脈流量。心臟的收縮、舒張活動(dòng)可通過(guò)張力換能器進(jìn)行記錄，心室內(nèi)壓可通過(guò)壓力換能器進(jìn)行記錄。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
????大鼠。
【實(shí)驗(yàn)器材】
ZL-620I醫(yī)學(xué)信號(hào)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、木錘、哺乳動(dòng)物類(lèi)手術(shù)器械一套、線繩、灌流液貯瓶、心臟Langendorff灌流設(shè)備、恒溫槽、氧氣瓶、恒溫器、燒杯、量筒、秒表、溫度計(jì)、雙層灌流槽、克氏液（Krebs液）、1：10000乙酰膽堿、注射器、針頭。
【方法和步驟】
實(shí)驗(yàn)裝置準(zhǔn)備??整個(gè)實(shí)驗(yàn)裝置包括充氧、恒壓灌流和恒溫三個(gè)部分。充氧由氧氣瓶（也可用充氧的橡皮球囊）連接小塑料管插入充氧管持續(xù)供氧，氣泡要小而均勻。灌流壓力的高低可通過(guò)調(diào)整灌流液貯瓶的高度來(lái)進(jìn)行，一般要求灌流溫文爾雅貯瓶?jī)?nèi)的中心管的下端距心臟的高度為70~90cm，可按心臟的大小而適當(dāng)調(diào)整。恒溫用恒溫器以保持灌流液溫度的恒定。由于恒溫器的水溫并不等于心臟灌流液的溫度，故在灌流插管的側(cè)管插入一溫度計(jì)以監(jiān)測(cè)灌流液的溫度，液溫為37℃左右。為了保證離體心臟的表面有溫度和濕度，故將心臟置于由玻璃或有機(jī)玻璃制成的雙層灌流槽內(nèi)，其內(nèi)層的容積約為100ml左右。槽的底部有漏斗形的開(kāi)口，其上方有用以保持槽內(nèi)溫度恒定的蓋子。外層密閉，在側(cè)面上有兩個(gè)小的開(kāi)口，一為恒溫水的進(jìn)水口，一為恒溫水的出水口。實(shí)驗(yàn)裝置見(jiàn)圖1。
圖1 ?Langerdorff法灌流實(shí)驗(yàn)裝置
標(biāo)本制備
摘取心臟：先準(zhǔn)備好手術(shù)器械及充氧的冷克氏液（4℃左右）。用木錘重?fù)舸笫蠛竽X部，擊昏后，仰置于手術(shù)臺(tái)上。迅速治胸前壁正中剪開(kāi)皮膚，打開(kāi)勝負(fù)難測(cè)腔，輕輕提起心臟，小心剪斷腔靜脈、主動(dòng)脈及心臟周?chē)M織，迅速將心臟連同一段主動(dòng)脈取出。手術(shù)過(guò)程中注意不要損傷心臟，主動(dòng)脈根部要留0.5cm的長(zhǎng)度以備插管用。心臟取出后立刻置于預(yù)先備好的充氧冷克氏液中，用手指輕壓心室以利于其中的剩血排出，防止凝血塊形成。用注射器向主動(dòng)脈根部徐徐注入經(jīng)充氧的冷克氏液，其作用是一方面使心臟停跳以減少其能量消耗，另一方面也供以沖洗冠狀血管，去除殘血，以免形成凝血小塊堵塞血管。迅速剪去心臟周?chē)慕M織（包括肺組織、氣管以及附著于心臟上的其他組織），認(rèn)清主動(dòng)脈、腔靜脈及肺動(dòng)脈的解剖位置。
灌流心臟：事先將灌流系統(tǒng)的灌流瓶及管充滿克氏液，并連續(xù)充氧。將主動(dòng)脈套進(jìn)灌流插管末端的動(dòng)脈套管上，并以事先備好的棉線結(jié)扎固定之。套管插進(jìn)主動(dòng)脈不宜過(guò)深，以免損傷主動(dòng)脈瓣及堵住冠狀動(dòng)脈開(kāi)口，影響冠狀血管的灌充。灌流液的溫度開(kāi)始應(yīng)低些，以后逐漸升高到所要求的溫度。心臟經(jīng)充氧的溫度克氏液灌流后，在1min內(nèi)即可開(kāi)始恢復(fù)跳動(dòng)。但起初心率較慢，并常有心律不齊，以后逐漸變快而且心律也逐步恢復(fù)正常，并穩(wěn)定在250~300次/分鐘，可維持?jǐn)?shù)小時(shí)。
3．實(shí)驗(yàn)記錄
（1）點(diǎn)擊ZL-620I菜單“實(shí)驗(yàn)/常用生理學(xué)實(shí)驗(yàn)”，選擇“大鼠離體心臟灌流”，設(shè)置ZL-620I放大器和采樣參數(shù)（表1）。
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（2）冠脈流量的測(cè)定：灌流液進(jìn)入冠狀血管后到達(dá)右心房，經(jīng)腔靜脈及肺動(dòng)脈滴入雙層灌流槽中，經(jīng)槽底部的漏斗形開(kāi)口流出，用量筒收集（也可用ZL-620I記滴）一段時(shí)間內(nèi)的流出液即為冠脈流量。流量基本穩(wěn)定后，進(jìn)行下列各項(xiàng)觀察。
（3）心臟的收縮、舒張活動(dòng)觀測(cè)：用蛙心夾在心室舒張期夾住心尖，并將蛙心夾在線頭通過(guò)滑輪連至張力換能器的應(yīng)變梁上，記錄心臟活動(dòng)。
4．觀察項(xiàng)目
（1）記錄正常情況下冠脈流量（ml/min）和心臟活動(dòng)作為對(duì)照。
（2）由灌流插管的側(cè)管注入1：10 000腎上腺素溶液0.5ml，觀察冠脈流量和心臟活動(dòng)的變化。
（3）由灌流管的側(cè)管注入1：10 000乙酰膽堿溶液0.5ml，觀察冠脈流量和心臟活動(dòng)的變化。
（4）由灌流插管的側(cè)管注入0.5ml(10U/ml)垂體后葉素，觀察冠脈流量和心臟活動(dòng)的變化。
【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】
統(tǒng)計(jì)全班各組的結(jié)果，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，比較各種處理前后冠脈流量和心臟活動(dòng)的變化。
【注意事項(xiàng)】
緩慢打開(kāi)氧氣瓶，以灌流管中約每10cm出現(xiàn)一個(gè)氧氣泡的氣流速度對(duì)溶液充氧。
制作離體心臟標(biāo)本時(shí)操作要迅速，不要損傷心臟。
灌流壓力和灌流液溫度要嚴(yán)格維持恒定。
