內(nèi)切蛋白酶-Lys-C?是一種絲氨酸內(nèi)切蛋白酶，可特異性切割賴氨酸羧基側(cè)的肽鍵。它的分子量為?30,000?道爾頓，在?7.0-9.0?的最佳?pH?范圍內(nèi)使用。Lys-C?被氟磷酸二異丙酯、TLCK、抑肽酶和亮肽素抑制。

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已發(fā)表的用于分離肝細(xì)胞的大多數(shù)傳統(tǒng)方法使用粗制和部分純化的酶制劑，包括各種類型的膠原酶和其他蛋白酶。最近，使用具有更好特征的膠原酶制劑，例如?Worthington 1?型和?4?型?(CLS-1, 4)?提供了更好的結(jié)果。所有粗制膠原酶制劑都可能包含批次可變的污染蛋白酶、酯酶和其他酶，需要研究人員預(yù)先篩選幾批酶和/或不斷修改分離參數(shù)和方案。

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Worthington?艾美捷肝細(xì)胞分離系統(tǒng)的開發(fā)旨在為研究人員提供可靠、方便和一致的肝細(xì)胞分離系統(tǒng)。通過(guò)使用該試劑盒中包含的預(yù)先優(yōu)化的酶組合，可以最大限度地減少批次間的差異并提高分離肝細(xì)胞的質(zhì)量。此外，Worthington?通過(guò)從成年大鼠中分離肝細(xì)胞對(duì)每批產(chǎn)品進(jìn)行使用測(cè)試，以確保活細(xì)胞的性能、可靠性和一致的產(chǎn)量。

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該方法基于?Berry, MN?所描述的方法，由?Seglen, PO?修改（細(xì)胞生物學(xué)方法，第?XIII?卷，David M. Prescott?編輯，學(xué)術(shù)出版社，1976?年；第?4?章，“分離的大鼠肝細(xì)胞的制備”，?pp 29-83），并與幾位研究人員一起進(jìn)一步優(yōu)化。

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穩(wěn)定性/儲(chǔ)存:?試劑在環(huán)境溫度下在正常運(yùn)輸過(guò)程中的預(yù)期時(shí)間內(nèi)是穩(wěn)定的，但包裝在到達(dá)時(shí)應(yīng)冷藏。使用前，內(nèi)容物可在?2-8°C?下儲(chǔ)存?4-6?個(gè)月。儲(chǔ)存在?2-8°C。

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包裝內(nèi)容?該包裝包含足夠的材料，可用于五次單獨(dú)的成年大鼠肝臟灌注。對(duì)于更大或更小的組織應(yīng)用，請(qǐng)?jiān)诿總€(gè)步驟中準(zhǔn)備相應(yīng)體積的試劑，并按照協(xié)議中所述的相同比例將它們組合起來(lái)。

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小瓶?#1：10X CMF-HBSS?濃縮液，1?瓶，500ml?無(wú)菌不含鈣和鎂的漢克平衡鹽溶液?(CMF-HBSS)。該溶液用于在加入解離酶溶液之前洗滌和灌注肝臟。

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小瓶?#2：22,500?單位膠原酶和?30?單位彈性蛋白酶，5?瓶?Worthington?膠原酶（代碼：CLS-1）和彈性蛋白酶（代碼：ESL），通過(guò)?0.22 μm?孔徑膜過(guò)濾，并凍干。使用前，用?L-15/MOPS?溶液復(fù)溶，并按照以下步驟輕輕旋轉(zhuǎn)以溶解內(nèi)容物。將未溶解的小瓶?jī)?chǔ)存在?2–8°C。

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3?號(hào)小瓶：每個(gè)?1,000?單位?DNase I，5?瓶?Worthington DNase I（代碼：D），通過(guò)?0.22 μm?孔徑膜過(guò)濾，并凍干。使用前，用?L-15/MOPS?溶液復(fù)溶，并按照以下步驟輕輕旋轉(zhuǎn)以溶解內(nèi)容物。將未溶解的小瓶?jī)?chǔ)存在?2–8°C。

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小瓶?#4：0.15M MOPS，pH 7.5，1?瓶，75ml 0.15M MOPS，pH 7.5?緩沖濃縮液，用于緩沖重構(gòu)的?Leibovitz L-15?培養(yǎng)基。5?號(hào)小瓶：7.5%?碳酸氫鈉?(NaHCO3)，1?瓶，100ml 7.5%?碳酸氫鈉濃縮液，用于緩沖稀釋的?CMF-HBSS。

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小袋，包含?Leibovitz L-15?培養(yǎng)基粉末，1 x 1L?通過(guò)切開信封頂部并將內(nèi)容物倒入含有大約?800?毫升細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)水的燒杯中，重構(gòu)小袋的全部?jī)?nèi)容物。用額外的?100?毫升水沖洗袋子?2 - 3?次。使總體積達(dá)到?1000?毫升并通過(guò)?0.22?微米孔徑的膜過(guò)濾。

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Worthington?艾美捷肝細(xì)胞分離系統(tǒng)部分參考文獻(xiàn)：

Alpini et al., "Recent Advances in the Isolation of Liver Cells", Hepatology (1994) 20:494-514.

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Berry, M.N., Edwards, A.M., and Barritt, G.J.; Isolated Hepatocytes: Preparation, Properties and Applications, RH Burdon and PH Van Knippenberg, eds., Elsevier, Amsterdam, New York, Oxford, Chapt. 2, 1991.

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Chen H-L, Wu H-l, Fon C-C, Chen P-J, Lai, M-Y, Chen D-S (1998) Long-term culture of hepatocytes from human adults. Biomedical Science 5:435-440

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DeRobertis, E.D.P., Saez, F.A. and DeRobertis, E.M.F.: Cell Biology, 6th ed., W.B. Saunders Co., Philadelphia, PA, 1975.

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Freshney, R. Ian: Culture of Animal Cells, Alan R. Liss, Inc., New York, 2000.

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Worthington相關(guān)研究：

細(xì)胞分離優(yōu)化系統(tǒng)

膠原酶

脫氧核糖核酸酶?I

彈性蛋白酶

透明質(zhì)酸酶

新生兒心肌細(xì)胞分離系統(tǒng)

中性蛋白酶（分散酶）

木瓜蛋白酶

木瓜蛋白酶解離系統(tǒng)

蛋白酶K

胰蛋白酶

胰蛋白酶抑制劑

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Worthington專注于生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。其核心酶包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。艾美捷科技是XXX的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。