1、細胞分選方式

細胞分選也稱為細胞的分離純化，是一種根據(jù)細胞所具有的特性把某種特定的細胞亞群從混合的細胞樣本中分離出來的技術，在體外診斷、治療和細胞學基礎研究等方面均具有重要作用。根據(jù)細胞的免疫特性和理化性質，目前常見的細胞分選方式主要有以下三種：

（1）免疫磁珠分選：基于細胞表面抗原能與連接有特異性抗體磁珠結合的特性，在外加磁場作用下，細胞通過與磁珠上偶聯(lián)的抗體特異性識別而被吸附，在磁場中停留，從而達到細胞分離的目的。

（2）流式細胞分選：通過不同的熒光素標記樣本中的一種或多種細胞，再經由流式細胞儀區(qū)別不同細胞的相關參數(shù)（光散射和熒光特征），將不同細胞分離。

（3）密度梯度離心：用一定的介質在離心管內形成連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細胞混懸液或勻漿置于介質的頂部，通過重力或離心力的作用使細胞分層、分離。

其中，免疫磁珠分選由于其所需設備簡單，對技術人員要求不高，分選所得的細胞通量大、靈敏度高、純度好且細胞活性和復蘇率較好，對于下游應用影響較小而被廣泛應用。

2、細胞分選在細胞治療中的重要性

細胞療法是近些年醫(yī)藥研發(fā)中發(fā)展非常迅速的一個領域，是藥物開發(fā)一種全新的模式，它在癌癥、傳染病和自身免疫等疾病的治療方面展示出了巨大的潛力。并且，隨著國內外政策的放行與大力支持，免疫細胞治療相關的各項臨床研究在全球相繼開展，細胞治療的相關企業(yè)也隨之興起。盡管近幾年細胞治療產品的細胞來源和種類不斷豐富，但針對T細胞進行改造的細胞療法目前仍占據(jù)整個細胞治療領域的主導位置。

T細胞的有效分選能夠減少病毒的用量，提高轉導效率，節(jié)省成本。另外有研究顯示，T細胞分選能直接影響到CAR-T細胞的抗腫瘤活性，關系到后續(xù)T細胞的激活和擴增，是CAR-T終產品質量的保證。

3、細胞分離陰選和陽選的區(qū)別

免疫磁珠細胞分選根據(jù)所標記細胞的不同大致可分為陽性分選（正選）和陰性分選（負選）：

陽選（正選）：通常是指對目的細胞進行標記，使其滯留在磁場中，直接獲得目的細胞。陽性選擇是最廣泛驗證、靈活有效的方法，理論上來講只要有目的明確的細胞表面標記物，我們都可以用細胞陽性選擇的方法識別抓取，在非常極端的情況下，比如非常稀的細胞、弱表達的細胞表面標記物、充分徹底去除特定細胞群都應考慮陽性分選。

陰選（負選）：通常是指對非目的細胞進行標記和去除得到目的細胞。避免通過直接地標記目的細胞（比如使用表面特異性抗體標記），從而來減少細胞活化的可能。

4、T細胞分離陰選和陽選的選擇

在免疫防御中，T細胞有著不可替代的作用。在過去十多年時間里，T細胞治療在臨床試驗中突飛猛進，取得了前所未有的突破。目前T細胞主要的分選策略有兩種：一是以納米級別磁珠為基礎的分選，主要策略包括有CD4/CD8的分選或CD3的分選，而后聯(lián)合使用納米級別CD3/CD28激活試劑；二是以微米級別磁珠直接偶聯(lián)CD3/CD28抗體對T細胞進行分選及激活。

而如何選擇T細胞的分選方式，陰選還是陽選，表征Marker的確定，這就取決于具體的下游應用和生產工藝的考量。在選擇合適的分選方式時，應該慎重考量下游研究應用是否必須使用未標記的細胞，與細胞表面蛋白結合的磁珠或者抗體是否會影響下游的應用等因素。此外，獲得的目的細胞的純度、活率和回收率是否符合工藝要求，也是選擇分選方式需要考量的地方。

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