鑰孔血藍(lán)蛋白KLH是通過添加磺基SMCC交聯(lián)劑活化的馬來酰亞胺。主動(dòng)鉤子?KLH快速偶聯(lián)到肽和蛋白質(zhì)上的游離巰基。這種活化的載體蛋白節(jié)省了時(shí)間和金錢，因?yàn)椴恍枰獑为?dú)的交聯(lián)劑，反應(yīng)是一步反應(yīng)。

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鎖孔帽貝血藍(lán)蛋白是一種廣泛使用的載體蛋白，因?yàn)樗姆肿恿看螅?.5x105-1.3x107Da聚集體）和大量伯胺，可以與交聯(lián)劑反應(yīng)以偶聯(lián)肽。

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鑰孔血藍(lán)蛋白KLH有10毫克小瓶或我們的OneQuant?一次性使用線為8 x 2mg小瓶。

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艾美捷鑰孔血藍(lán)蛋白KLH#GBS-786-094是KLH（鎖孔帽貝血藍(lán)蛋白）的一種預(yù)激活形式，具有被磺基SMCC激活，并準(zhǔn)備通過半胱氨酸殘基。KLH是從軟體動(dòng)物圓紋蘇云蟲中分離出來的，屬于一個(gè)巨大的呼吸蛋白家族，血藍(lán)蛋白，發(fā)現(xiàn)于軟體動(dòng)物和節(jié)肢動(dòng)物。KLH的大分子量（400‐3000kD）使其成為一種優(yōu)異的免疫原的選擇。鑰孔血藍(lán)蛋白?KLH共有300‐600個(gè)反應(yīng)基團(tuán)可用于連接和制作ActiveHOOK??KLH是一種出色的載體蛋白。OneQuant鑰孔血藍(lán)蛋白?KLH以O(shè)neQuant凍干形式提供? 格式，2mg/瓶。

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重要信息：

a.為了確保完全耦合，我們建議使用推薦數(shù)量的試劑，因?yàn)檫@些試劑向其上的馬來酰亞胺基團(tuán)提供摩爾過量的肽載體蛋白。

b.對于不溶于1X Optimizer緩沖液III的肽，我們建議使用二甲基亞砜（<30%）。

c.該試劑盒設(shè)計(jì)用于通過游離巰基殘基。埃爾曼試劑（類別號(hào)BC87）可以測定游離巰基。如果被氧化，蛋白質(zhì)和肽可以被0.1-0.5%的β-巰基乙醇（類別號(hào)BC98）、5‐50mM DTT（類別號(hào)786‐227）或1‐10mM TCEP（類別號(hào)786‐230）。還原后，必須去除還原劑，我們建議

使用凝膠過濾旋轉(zhuǎn)柱（SpinOUT?，目錄號(hào)786‐170786‐171）。此方法不是適用于小肽（MW<1500）。

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協(xié)議

1.溶解一小瓶（2mg）OneQuant? 活動(dòng)掛鉤??500μl 1X優(yōu)化器中的KLH緩沖器??III或適用于巰基反應(yīng)的緩沖液。

2.使用前立即溶解2-10mg含巰基的肽或蛋白質(zhì)在500μl 1X Optimizer緩沖區(qū)中??III或適用于巰基反應(yīng)的緩沖液。

3.將含巰基的肽添加到ActiveHOOK中??KLH。翻轉(zhuǎn)混合管4-5次。

4.在室溫下培養(yǎng)30分鐘?；旌戏磻?yīng)物并孵育在4°C下再加熱1小時(shí)。

5.用合適的儲(chǔ)存緩沖液（如PBS）透析反應(yīng)1-2小時(shí)2-3改變透析緩沖液，以去除未偶聯(lián)的肽。

6.透析后，載體蛋白-肽綴合物即可使用。承運(yùn)人蛋白質(zhì)-肽綴合物可以儲(chǔ)存在-20°C下以備日后使用。

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將‐NH2修飾為‐SH用于缺乏巰基的蛋白質(zhì)和肽

1.將待巰基化的肽或蛋白質(zhì)懸浮在50mM三乙醇胺中，0.15M NaCl，1mM EDTA pH8.0。

2.加入3-4倍摩爾過量的特勞特試劑（Cat#BC95）。

3.在氮?dú)庀拢谑覝叵屡囵B(yǎng)反應(yīng)45分鐘。

4.使用SpinOUT從未反應(yīng)的Traut試劑中分離巰基化產(chǎn)物?列（SpinOUT??GT‐600（目錄號(hào)786‐170））或透析