細胞培養(yǎng)室有支原體污染怎么辦?
關(guān)鍵詞:細胞房消毒 ?細胞間消毒 細胞培養(yǎng)室消毒 ?細胞房污染?
支原體是目前已知一類能在無生命培養(yǎng)基上生長繁殖的最小的原核細胞微生物,分為兩個屬:一為支原體屬(Mycoplasma),有幾十個種;另一為脲原體屬(Ureaplasma),僅有一種。革蘭染色為陰性,但不易著色,一般用Giemsa染色,染成淡紫色。支原體在自然界分布廣泛,無細胞壁,直徑為0.1-0.3μm,且形態(tài)易變,極易通過除菌過濾器。
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大部分支原體繁殖速度比細菌慢,適宜生長溫度為35℃,適合于偏堿條件下生存(pH7.6—8.0),對酸耐受性差,對75%乙醇、煤酚皂溶液敏感。對熱比較敏感在細胞培養(yǎng)過程中如果在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)破碎的細胞很多,需要頻繁換液才能維持傳代培養(yǎng)的時候,即應(yīng)懷疑支原體污染。
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細胞培養(yǎng)過程中的支原體污染是一個世界性難題。當細胞(特別是傳代細胞)被支原體污染后,細胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變,而細胞的生長率一般并未發(fā)生顯著的影響,因而細胞被支原體污染一般難以察覺。

支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(某些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、被污染細胞造成的交叉污染、實驗器材的污染、制備細胞的原始組織或器官的污染,等等。
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支原體污染的嚴重性
(1)細胞外形可以沒有明顯的變化,支原體可以與細胞共存,污染后細胞液不會死亡,培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁;
(2)使用被支原體污染的細胞做實驗會嚴重影響實驗的結(jié)果,因為支原體會抑制細胞生長;導(dǎo)致染色體畸變;細胞膜抗原性改變;細胞復(fù)蘇后存活率降低等。
(3)影響細胞的代謝和功能:培液中的精氨酸被支原體大量消耗,引起細胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙;支原體活動使培液成分發(fā)生改變(如發(fā)酵型支原體降解糖類產(chǎn)生酸性物質(zhì)),影響細胞代謝。
(4)培養(yǎng)過程中細胞破碎較多,培養(yǎng)基pH變化明顯,需要頻繁更換新鮮培養(yǎng)基;
(5)細胞被支原體污染后會形成共生體系導(dǎo)致污染不斷擴大。
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組織細胞培養(yǎng)工作中,可以從以下幾方面來預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴格實驗操作;細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細胞培養(yǎng)基沖加入適量的抗生素。
抗生素主要用于消毒培養(yǎng)液,是培養(yǎng)過程中預(yù)防微生物污染的重要手段,也是微生物污染不嚴重時的“急救”方法。不同抗生素殺滅微生物不同,應(yīng)根據(jù)需要選擇。
根據(jù)相關(guān)的實驗室的管理經(jīng)驗,支原體污染的預(yù)防更為重要。有必要做好細胞房環(huán)境空間消毒。

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