免疫學(xué)必學(xué)實(shí)驗(yàn)：免疫組化（IHC）
免疫學(xué)必備三件套：蛋白質(zhì)免疫印跡（WB）、免疫組化（IHC）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），分別應(yīng)用于定性、定位和定量。
其中免疫組化實(shí)驗(yàn)，廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床病理診斷，在基礎(chǔ)研究中可用于確定細(xì)胞內(nèi)抗原，并對其進(jìn)行定位、定性及定量的分析，在臨床病理診斷方面，可用于判斷腫瘤的來源、分類和鑒別診斷及評估臨床治療。
今天梳理下免疫組化（IHC）實(shí)驗(yàn)的分類、實(shí)驗(yàn)操作，以及應(yīng)用實(shí)例的一些重點(diǎn)內(nèi)容。萌新打好基礎(chǔ)，老手鞏固知識！
特別提示：文末還有《實(shí)驗(yàn)室保命指南》可以免費(fèi)領(lǐng)取
?
一、免疫組化原理
1.免疫組織化學(xué)技術(shù) / IHC
IHC是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)）。通過帶顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞與對應(yīng)組織結(jié)合化學(xué)反應(yīng)顯色，對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究。
2.免疫組化分類
酶---免疫酶組織化
熒光素---免疫熒光組化
膠體金---免疫膠體金組化
高親和力物質(zhì)---親和免疫組化
①免疫酶組化
以酶標(biāo)記的抗體與組織作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物，通過光鏡對細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定位定量。
特點(diǎn)：信號定位準(zhǔn)確 ，標(biāo)本可長期保存，易于檢測陽性標(biāo)記與病變關(guān)系，方法簡便，易推廣，是目前最常用的技術(shù)。
②免疫熒光組化
用熒光素標(biāo)記的抗體檢查組織內(nèi)相應(yīng)抗原?？乖贵w復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射即會(huì)發(fā)出特定波長的熒光，在熒光顯微鏡下可對抗原定位或定量。
特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡便，應(yīng)用較廣。
利用熒光標(biāo)記的抗補(bǔ)體抗體進(jìn)行免疫熒光染色
箭頭指示表皮與真皮的交界有免疫復(fù)合物存在
③免疫膠體金技術(shù)
1）用膠體金標(biāo)記的抗體作為探針，對抗原進(jìn)行定性、定位，或定量研究。
2）膠體金是指金的水溶膠，能迅速而穩(wěn)定地吸附抗體而不影響抗體活性。
特點(diǎn)：膠體金有不同大小的顆粒，且電子密度高，所以特別適合于電鏡的定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。
④親和免疫組化
利用兩種物質(zhì)間高度親和特性及可標(biāo)記性，將酶等標(biāo)記物連接到親和物上，以對待檢物進(jìn)行檢測。
特點(diǎn)：靈敏度高，有利于微量抗原在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法最常用。
鼠抗人Wnt-2一抗，親和素-HRP染色，蘇木精復(fù)染(藍(lán)色).
二、免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟
1.免疫酶組化步驟
1）標(biāo)本制備
2）免疫染色
3）數(shù)據(jù)獲得（觀察）
三、免疫組化實(shí)例
1.IHC實(shí)例I-單染
IHC抗MISIIR抗體對異種移植腫瘤切片染色，DAB顯色，根據(jù)密度評分以評價(jià)表達(dá)量。
2.?IHC實(shí)例II-單染細(xì)胞定位
兔肝臟石蠟切片。Ki67 （棕色）及HE復(fù)染。圓圈指示陽性細(xì)胞，箭頭指示淋巴細(xì)胞。
3.IHC實(shí)例 III-雙染指示位置關(guān)系
S-100 神經(jīng)特異性蛋白 紅色; AE1/3 鱗狀細(xì)胞標(biāo)志物，棕色
鱗狀細(xì)胞（棕色）包繞神經(jīng)束膜內(nèi)（紅色）,部分侵入束膜
4.IHC實(shí)例 IV-雙染指示特定細(xì)胞表達(dá)
免疫組化雙染標(biāo)記大鼠結(jié)腸石蠟切片。指示巨噬細(xì)胞內(nèi)iNOS表達(dá)。
1）CD68-巨噬細(xì)胞標(biāo)志物
2）iNOS-誘導(dǎo)性NOS
5.IHC實(shí)例 V-三染
①Shh-細(xì)胞損傷標(biāo)志物
②K8/18及Ub指示細(xì)胞膨脹
③SMA-成肌纖維細(xì)胞標(biāo)志物
④Sox-9-前體細(xì)胞標(biāo)志物
⑤Gli-2-Hh通路活化標(biāo)志物
1）K8/K18（棕色）和Ub（紫紅色）雙陽性肝細(xì)胞
2）α-SMA （棕色）, gli-2（紅色）和sox-9 （藍(lán)色）三陽性細(xì)胞
6.IHC實(shí)例 VI-熒光三染
①SMA-647 纖維細(xì)胞標(biāo)志物
②Catenin –568 鈣黏蛋白
③Actin-FITC 細(xì)胞骨架
④DAPI-細(xì)胞核
小鼠腸組織切片，免疫熒光三染
老實(shí)說，免疫組化確實(shí)是個(gè)苦活，耗費(fèi)時(shí)間長，步驟多，還要經(jīng)常接觸有毒致癌物質(zhì)。想染出了漂亮的片子和實(shí)驗(yàn)結(jié)果就必須要有正確的實(shí)驗(yàn)思路和操作方法。
免疫組化實(shí)驗(yàn)已經(jīng)為大家整理了相關(guān)的學(xué)習(xí)資源，獲取方式：關(guān)注公眾號福麥斯生物，回復(fù)關(guān)鍵詞：實(shí)驗(yàn)903
?
