偶聯(lián)試劑盒的特點(diǎn)是備齊各種用品使用更方便，效率經(jīng)過(guò)優(yōu)化后更高，可以直接制備得到一個(gè)完整的親和層析柱。

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AF 488標(biāo)記試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單快速的方法標(biāo)記抗體、蛋白質(zhì)、多肽等含有游離氨基的樣本。該試劑盒設(shè)計(jì)用于直接從含有游離氨基的蛋白質(zhì)、肽和其他配體制備488，應(yīng)用于偶聯(lián)標(biāo)記

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艾美捷AF 488偶聯(lián)試劑盒：

Cat #: D-AKE520/D-AKE530/D-AKE540/D-AKE560/D-AKE580

Size: 100?μg*3

Storage: Stored at -20°C for 6 months, protected from light

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AF 488偶聯(lián)試劑盒樣品制備：

待標(biāo)記樣品的初始濃度應(yīng)高于2 mg/mL。提示蛋白濃度在2.5mg/mL以上。否則，在實(shí)驗(yàn)之前需要增加蛋白質(zhì)濃度。待標(biāo)記樣品的成分（或儲(chǔ)存緩沖液）應(yīng)符合以下要求：

（1） 不要含有氨基成分，否則會(huì)影響偶聯(lián)效果。

（2） 少量BSA不會(huì)影響偶聯(lián)效果。建議使用PBS作為存儲(chǔ)緩沖液。

（3） 如果樣品中含有可能干擾標(biāo)記的物質(zhì)，建議用PBS代替緩沖液。具體方法如下

將樣品加入超濾膜中，加入200-150μL PBS。在12000 g、4°C、10分鐘的溫度下離心，然后濾出濾液。然后再次加入PBS，并在12000g，4°C，10分鐘下離心。離心后，取出超濾管的內(nèi)芯，將其置于干凈的外管中，并在4000g，4℃，2分鐘下離心以收集樣品。

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待標(biāo)記樣品的成分（或儲(chǔ)存緩沖液）要求清單：

注：請(qǐng)根據(jù)實(shí)際樣品體積，放大或縮小試劑盒各成分在反應(yīng)系統(tǒng)中的體積。（例如FlyLink??AF 488標(biāo)簽套件）

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不同規(guī)格的推薦合適標(biāo)簽樣本量和標(biāo)簽系統(tǒng)如下：

Size ???Amount of Sample ???Optimal Labeling System

3?×100 μg ????3×100 μg ??????3×50-3×75 μL

1 mg ????????1 mg ????????500-750 μL

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以下操作步驟基于3×100μg規(guī)格。對(duì)于其他規(guī)格，請(qǐng)相應(yīng)地調(diào)整日期。如果您需要調(diào)整音量，請(qǐng)保持樣本大小不變，并更改FlyLink的音量??AF 488標(biāo)簽解決方案，Activated FlyLink??AF 488溶液和去離子水。1.添加15μL FlyLink??AF 488將溶液標(biāo)記到待標(biāo)記的樣品溶液中，并用移液管輕輕混合。2.移液管7.5μL活性FlyLink??AF 488溶液加入步驟1中的反應(yīng)溶液中，加入去離子水至150μL（注：此體積為標(biāo)記系統(tǒng)），輕輕混合，并在37°C的黑暗中靜置1小時(shí)。

注：步驟1/2屬于標(biāo)記步驟。

3.向步驟2中的反應(yīng)溶液中加入適量PBS（固定體積約為500μL），輕輕混合，將溶液移至純化柱中。在4°C下以12000 g離心10分鐘。

4.丟棄濾液，向純化柱中加入適量PBS（固定體積約500μL）。在4°C下以12000 g離心10分鐘。

5.取出純化柱，將其倒置在干凈的離心管中，在4000g下離心2分鐘4°C。離心管中收集的溶液為偶聯(lián)產(chǎn)物。

注：步驟3/4/5為純化步驟。該綴合物在4°C的黑暗中可以穩(wěn)定一個(gè)多月。為了長(zhǎng)期保存，綴合物應(yīng)裝在小份中，置于-20°C的黑暗中，并加入一定體積的甘油。避免重復(fù)冷凍和解凍。