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AFM測試樣品制備

2022-08-22 10:44 作者:bili_74204057874  | 我要投稿

在做原子力顯微鏡AFM測試時,科學(xué)指南針檢測平臺工作人員在與很多同學(xué)溝通中了解到,好多同學(xué)對AFM測試不太了解,針對此,科學(xué)指南針檢測平臺團(tuán)隊(duì)組織相關(guān)同事對網(wǎng)上海量知識進(jìn)行整理,希望可以幫助到科研圈的伙伴們;

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有襯底的樣品

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樣品臺最大尺寸200 mm(這里以Bruker儀器為例),樣品表面最大起伏一般要求1微米以下。

塊體樣品:塊體直徑大于10 mm時,清潔樣品表面(氮?dú)獯祾呋蚓凭仍噭┣逑矗┖蠓胖迷跇悠放_打開真空吸附固定樣品,塊體直徑小于10 mm時,需要將樣品粘貼到鐵片上后進(jìn)行測試(圖1);

薄膜樣品:清潔表面,尺寸要求和上述塊體一樣,固定在樣品臺上測試;

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圖1有襯底樣品的制備 (a) 樣品制備到硅片上 (b) 樣品制備到金屬片上

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無襯底樣品

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生物樣品:將溶液分散后滴到干凈硅片或云母上,靜置10分鐘,用氮?dú)獯蹈珊鬁y試;某些生物大分子,需要特定的吸附固定方式,比如DNA分子,為了增強(qiáng)帶負(fù)電荷的DNA和同樣帶負(fù)電荷的云母基底間的相互作用力,在DNA樣品中加入一些二價(jià)陽離子如Mg2+,Zn2+等。

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細(xì)胞等活性生物樣品:

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(1)大氣環(huán)境下掃描

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1)細(xì)胞固定可以采用自然干燥法,但是經(jīng)過此法處理的細(xì)胞與活細(xì)胞狀態(tài)相差甚大。

2) 溶液固定法

①:將培養(yǎng)好的細(xì)胞用2.5 %戊二醛固定10分鐘,之后用氮?dú)獯蹈?/p>

②:瓊脂糖凝膠固定法,對細(xì)胞幾乎沒有損傷,可以更好的維持細(xì)胞的原始狀態(tài)。

3)為防止其他因素(如培養(yǎng)液里面的鹽等成分結(jié)晶或聚集)的干擾,要注意對樣品進(jìn)行清洗,根據(jù)經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行。

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(2)液體環(huán)境下掃描

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液相環(huán)境下,由于細(xì)胞與基底接觸不是很牢固,細(xì)胞有時會跟著探針滑動,成像穩(wěn)定性稍差,可以用瓊脂凝膠固定法或?qū)妆砻孢M(jìn)行聚賴氨酸(表面帶正電)修飾,利用聚賴氨酸與細(xì)胞(表面帶負(fù)電)間的靜電相互作用來固定細(xì)胞。粉末:將粉末放入酒精或丙酮中超聲一段時間后分散均勻,將溶液滴到云母或硅片、玻璃片上,加熱烘干后用氮?dú)獯祾弑砻婧筮M(jìn)行測試;

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薄膜(有機(jī)或無機(jī)薄膜):將薄膜裁剪合適大小后,用專用雙面膠帶粘貼到基底上(一定固定牢固,薄膜貼平,無氣泡、傾斜或大的起伏等),氮?dú)獯祾吆筮M(jìn)行測試。

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測試需要導(dǎo)通的樣品

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有襯底樣品:襯底表面需鍍金、鉑等導(dǎo)電薄膜,將襯底用導(dǎo)電銀漿固定在樣品臺上,保證襯底上表面和樣品臺導(dǎo)通(圖2);

無襯底粉末:將粉末放置在溶液中超聲分散,滴到導(dǎo)電襯底上后烘干,放置在樣品臺上進(jìn)行測試。

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圖2 測試需要導(dǎo)通樣品的制備 (a) 導(dǎo)電銀漿粘貼樣品(b) 銅膠帶連接用品表面和樣品臺

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