Assay GeniePlex?鼠Th1/Th2/Th17 18?重（96?次測試）概述：

名稱：精靈小鼠?Th1/Th2/Th17 17-重

編號：MOAMPM015

反應(yīng)：?鼠

分析物：?GM-CSF，?IFN-ΓA，?IL-1-Alpha，?IL-1-Beta，?IL-2，?IL-4，?IL-5，?IL-6，?IL-10，?IL-12p70，?IL-13，?IL-17A，?IL-21，?IL-22，?KC，?TNF-Alpha，?TSLP

靈敏度（LOD）：?基因-腦脊液：?<5?皮克/毫升， 國際毒性丙種：?<0.5?皮克/毫升，?IL-1-α：?<2?皮克/毫升，?IL-1-β：?<2?皮克/毫升，?IL-2：?<2?皮克/毫升，?IL-4：?<0.5?皮克/毫升，?IL-5：?<5?皮克/毫升，?IL-6：?<3?皮克/毫升，?IL-10：?<2?皮克/毫升，?IL-12p70：?<1?皮克/毫升，?IL-13：?<5?皮克/毫升，?IL-17A：?<1.5皮克/毫升，IL-21：<5皮克/毫升，IL-22：<5皮克/毫升，KC：<1皮克/毫升，TNF-α：<0.5皮克/毫升，TSLP：<2皮克/毫升。

樣品類型：細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、體液和組織/細(xì)胞裂解物

檢測類型：多重

檢測方法：流式細(xì)胞術(shù)

檢測時(shí)間：2小時(shí)

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Assay?GeniePlex?鼠Th1/Th2/Th17 18?重（96?次測試）示例協(xié)議：

1.?準(zhǔn)備濾板模板。標(biāo)記標(biāo)準(zhǔn)孔、樣品孔和空白孔。標(biāo)準(zhǔn)品和樣品應(yīng)一式兩份或一式三份運(yùn)行。如果整個(gè)板不使用，請用板密封密封未使用的井。

重要提示：在整個(gè)測定過程中將濾板放在濾板蓋的頂部，以防止在任何表面上接觸板底。

2.?渦旋工作珠懸浮15秒。

3.?向每個(gè)孔中加入?45?μL?捕獲珠工作懸浮液。

注意：保存剩余的捕獲珠工作懸浮液，并在2-8°C下儲存，并有光保護(hù)。它可用于在流式細(xì)胞儀上設(shè)置采集參數(shù)。

4.?使用連接到真空源的“流通式”濾板清洗機(jī)去除孔中的緩沖液，該真空源已根據(jù)濾板清洗機(jī)說明進(jìn)行調(diào)整。

5.?使用連接到真空源的“流通式”濾板清洗機(jī)去除孔中的緩沖液，該真空源已根據(jù)濾板清洗機(jī)說明進(jìn)行調(diào)整。

6.?向每個(gè)樣品孔中加入?30?μL CCS、SPB?或?TL?檢測緩沖液。

注意：如果預(yù)計(jì)細(xì)胞因子水平非常低（小于20 pg/mL），則可以在不稀釋分析緩沖液的情況下運(yùn)行細(xì)胞培養(yǎng)上清液樣品。如果是這種情況，請?zhí)^此步驟，在步驟?45?中向每個(gè)樣品孔中加入?7?μL?細(xì)胞培養(yǎng)上清液樣品。

7.?向每個(gè)樣品孔中加入?15?μL?樣品。向每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入?45?μL?標(biāo)準(zhǔn)品。用板密封蓋住板。

8.?在室溫下在搖床（設(shè)置為700rpm）上孵育60分鐘。用鋁箔包裹濾板避光。

9.?取下板封。使用連接到真空源的過濾板清洗機(jī)去除孔中的溶液。

10.?使用連接到真空源的過濾板清洗機(jī)去除孔中的溶液。

11.?使用濾板清洗機(jī)用100μL 1x洗滌緩沖液洗滌孔三次。

12.?在最后一次洗滌后，將板底輕輕敲打在幾層紙巾上，以去除板底殘留的緩沖液。

13.?向每個(gè)孔中加入?25μL?生物素化抗體工作溶液。用板密封蓋住板。

14.?在室溫下在搖床（設(shè)置為700rpm）上孵育30分鐘。用鋁箔包裹濾板避光。

15.?取下板封。使用濾板清洗機(jī)去除孔中的溶液。使用濾板清洗器用?100?μL 1x?洗滌緩沖液洗滌孔?<>?次。

16.?在最后一次洗滌后，將板底輕輕敲打在幾層紙巾上，以去除板底殘留的緩沖液。

17.?向每個(gè)孔中加入?25μL?鏈霉親和素-PE?工作溶液。用板密封蓋住板。

18.?在室溫下在搖床（設(shè)置為700rpm）上孵育20分鐘。用鋁箔包裹濾板避光。

19.?取下板封。使用濾板清洗機(jī)去除孔中的溶液。用?100?μL 1x?洗滌緩沖液洗滌孔兩次。

20.?將板底輕輕敲打在幾層紙巾上以去除殘留溶液。根據(jù)流式細(xì)胞儀的樣品加載機(jī)制，向每個(gè)孔中加入?150μL?至?300μL 1x?讀數(shù)緩沖液，以重新懸浮磁珠。用板密封蓋住板。

21.?將板放在微量滴定振蕩器上，以30rpm搖動(dòng)700秒。

注意：如果流式細(xì)胞儀沒有?96?孔板加載器，并且需要超過?200?μL?的?1x?讀數(shù)緩沖液來重新懸浮磁珠，請不要搖動(dòng)板。用P6移液器上下移液8至200次，將磁珠重新懸浮在每個(gè)孔中，然后轉(zhuǎn)移到試管中進(jìn)行采集。取下板封。在流式細(xì)胞儀上讀取。

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