我們給小白鼠服用非布司他11天，解剖之后發(fā)現(xiàn)腎臟顏色泛白，而且腎臟的病變程度，與給藥樣品之間呈劑量依賴關(guān)系，隨著劑量的增加，腎臟受損程度增強。這些泛白的腎臟樣本，我們保留了一部分，用來進行更細致的研究。

我先說目前的研究結(jié)果——高效液相與質(zhì)譜檢測數(shù)據(jù)顯示，病變的腎臟中含有大量的黃嘌呤，顯著高于正常組的樣本，增幅達10倍以上。

有興趣的小伙伴，一起來看看主要的研究過程：

我們的科學(xué)家從-80度冰箱里面取出樣本，加入特定的試劑，然后進行勻漿，再經(jīng)過高速離心、微孔濾膜過濾等操作步驟之后，就可以對提取液進行HPLC分析了。

結(jié)果可以看到：腎臟組織勻漿提取液的圖譜中有很多信號峰；與正常組相比，病變腎臟樣本的圖譜中有一個信號峰顯著大幅升高，其峰面積占比達到了14.5%；比正常組的1.1%高出了12.2倍；這意味著在病變的腎臟樣本中該物質(zhì)的含量占比顯著高于正常組的樣本。

看到這樣的顯著差異，我們的科學(xué)家進行了質(zhì)譜分析。數(shù)據(jù)顯示，這個物質(zhì)的分子量是152.02630，分子式為C5H4N4O2[M-H]-根據(jù)我的知識，它肯定是黃嘌呤，我有100%的把握。

格么問題來了，腎臟中有這么多的黃嘌呤，血液中高不高呢？還好，我們在-80度冰箱有血清留樣。

不賣關(guān)子，還是直接說檢測結(jié)果——高效液相與質(zhì)譜檢測數(shù)據(jù)顯示，灌胃8 mg/kg非布司他組的小鼠血清中，黃嘌呤濃度顯著高于正常組，增幅為272.2%；次黃嘌呤濃度也顯著高于正常組，增幅為98.8%。尿酸濃度顯著下降，降幅為68.4%。

因為醫(yī)院里面常用的自動生化分析儀無法對血清嘌呤進行檢測；因此我們需要使用液相。科學(xué)家們首先要開發(fā)并優(yōu)化液相分析方法，得益于檢測啤酒的經(jīng)驗，過程還算順利。進行液相定量分析之前，用標準品建立了標準曲線。

然后從-80度冰箱里面取出血清樣本，吸取等量血清并加入特定的試劑，進行蛋白沉淀、除雜，然后高速離心、采集上清；首先進行了Q-TOF-MS檢測，并且，這次隨行檢測了黃嘌呤與次黃嘌呤的標準品?？梢栽俅未_認，腎臟勻漿提取液中那個顯著增加的信號峰就是黃嘌呤。

而這次的給藥組小鼠血清樣本中，檢測到黃嘌呤與次黃嘌呤的信號也非常明顯。

這是很好理解的，非布司他是通過抑制黃嘌呤氧化酶的活性，阻止次黃嘌呤和黃嘌呤被氧化生成尿酸，從而達到降尿酸效果的。所以，上次我看到了質(zhì)譜給出的分子量與分子式之后，就有足夠的把握斷定那就是黃嘌呤。

另外，灌胃了別嘌醇的小鼠血清里面，嘌呤情況是不是也類似呢？記錄顯示，也還有樣本保存在-80度冰箱，接下來繼續(xù)檢測。

HPLC檢測數(shù)據(jù)顯示，灌胃20mg/kg別嘌醇組的小鼠血清中，黃嘌呤濃度顯著高于正常組，增幅為397.6%； 次黃嘌呤濃度也顯著高于正常組，增幅為558.6%。 樣本中尿酸濃度低于定量限了，接近為0。

這說明，在采血的時間點，別嘌醇的藥效非常顯著，對黃嘌呤氧化酶的抑制率非常高，所以，雖然血液中黃嘌呤很多，但是生成的尿酸很少或者幾乎沒有；加上小鼠的尿酸氧化酶能夠催化尿酸生成尿囊素，血清中就難以測到尿酸了。

基于之前已經(jīng)優(yōu)化好的液相分析方法，以及標準品和標準曲線，檢測工作就相對比較簡單，血清經(jīng)過預(yù)處理之后，交給HPLC進行檢測，就不再贅述了。這里要強調(diào)的是，醫(yī)院里面常用的自動生化分析儀無法對血清嘌呤進行檢測，要不然就可以更加快速簡便了。

格么問題又來了，灌胃別嘌醇的小鼠，那些病變的腎臟中嘌呤是不是大幅升高呢？吃相同降尿酸原理的別嘌醇或非布司他，小白鼠尿液中的嘌呤會不會也這樣呢？

這就需要再開一個實驗了，并且使用代謝籠收集小白鼠的尿液，然后檢測黃嘌呤與次黃嘌呤的濃度，以及排泄總量。

有了結(jié)果我會及時更新，拜拜。