細胞劃痕愈合法是測定細胞遷移運動與愈合能力的方法,類似體外傷口愈合模型,在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細胞上,用微量槍頭或其它硬物在細胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線,去除中央部分的細胞,然后繼續(xù)培養(yǎng)細胞至實驗設定的時間,取出細胞培養(yǎng)板,觀察周邊細胞是否生長(修復)至中央劃痕區(qū),以此判斷細胞的生長遷移及修復能力。

特點:?

1.?在一定程度上模擬了體內(nèi)細胞遷移的過程。

2.?非常適合研究細胞與胞外基質(ECM),細胞與細胞之間相互作用引起的細胞 遷移。

3.?與包括活細胞成像在內(nèi)的顯微鏡系統(tǒng)兼容,可用于分析細胞間的相互作用。

4.?研究細胞遷移的體外實驗中最簡單的方法。

傳統(tǒng)實驗方法 實驗步驟:?

1.?培養(yǎng)板接種細胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標記(方便拍照時定位同一 個視野)。

2.?細胞消化后接入12孔板,數(shù)量以貼壁后鋪滿板底為宜(數(shù)量少時可培養(yǎng)一段時間至鋪滿板底)。

3.?細胞鋪滿板底后,用1 ml槍頭垂直于孔板制造細胞劃痕,盡量保證各個劃痕寬度一致。(人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性,影響實驗結果,這也是該方法最大的缺陷。)

4.?吸去細胞培養(yǎng)液,用PBS沖洗孔板三次,洗去劃痕產(chǎn)生的細胞碎片。

?5.?加入無血清培養(yǎng)基,拍照記錄。

6.?將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng),每隔4-6小時取出拍照。

7.?根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實驗結果。