急性腦血栓動(dòng)物模型【動(dòng)物實(shí)驗(yàn)代做】

【造模機(jī)制】采用綠光光照誘導(dǎo)建立大鼠腦血栓模型，這種光化學(xué)誘導(dǎo)大腦中動(dòng)脈血栓形成的機(jī)制主要是四碘四氯熒光素鈉(虎紅 B)在綠色單光作用下產(chǎn)生并釋放單態(tài)氧,使血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上的多種不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化，不僅使細(xì)胞膜的通透性改變,Ca+內(nèi)流增加,而且可促進(jìn)血小板聚集與黏附,血栓形成。凝血過程活化產(chǎn)生大量血管活性物質(zhì)及神經(jīng)毒性物質(zhì)，破壞腦細(xì)胞及血腦屏障，同時(shí)光化學(xué)誘導(dǎo)大腦中動(dòng)脈閉塞導(dǎo)致腦組織缺血性損害，

【造模方法】選用 SD雌性大鼠,體重 250～300g,12 周齡。1%戊***鈉(30mg/kg)腹腔注射麻醉動(dòng)物，經(jīng)左側(cè)顳部入路,在實(shí)驗(yàn)鼠的左耳至左眼外呲連線近眼外眥 1/3 處做一垂直長(zhǎng)約 2cm的弧形切口，分離顳肌，拉開下頜關(guān)節(jié)，于卵圓孔前上方用牙科鉆做一直徑約為5mm的骨窗，切開硬腦膜可見大腦中動(dòng)脈(MCA),選擇 MCA 表面血管約5mm,將光纖所射出的光束垂直投射于MCA，光照分兩步，首先將光纖移至MCA起始部，經(jīng)股靜脈注入光敏劑，1.5%四碘四氯熒光素鈉（2ml/kg),5分鐘后，持續(xù)光照10分鐘；再將光纖移至嗅束至大腦下靜脈段的MCA血管表面，再注入半量的四碘四氯熒光素鈉，再持續(xù)照射 10分鐘，光照結(jié)束后，依次縫合肌肉及皮膚，模型制作完畢，單籠飼養(yǎng)。觀察指標(biāo):

1.神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè) 造模后0.5天、1天、2天、5天，根據(jù)Berdson 評(píng)分分級(jí)法，分別觀察其神經(jīng)和行為變化：①動(dòng)物一般情況差，活動(dòng)減少，倦曲為1分；②將動(dòng)物置于平面上，推其雙肩，使其向?qū)?cè)移動(dòng)。如雙側(cè)阻力對(duì)等且有力記0分，不對(duì)稱根據(jù)不同程度輕、中、重分別記為：1分、2分、3分；③提鼠尾，使其前肢伸展爬行，觀察兩前肢著地情況，若對(duì)稱為0分，若兩前肢著地不對(duì)稱時(shí)，提鼠尾使前肢離開地面，觀察兩肢屈曲情況，如腕屈曲，肘屈曲，肩內(nèi)旋，每出現(xiàn)一項(xiàng)記1分，三項(xiàng)均出現(xiàn)記3分；④將鼠置籠壁上，向后拉，觀察其兩前肢抓握籠壁能力大小，從而判定兩前肢的肌張力，若雙側(cè)肌張力對(duì)等且有力為0，若不對(duì)稱，根據(jù)手術(shù)對(duì)側(cè)前肢肌張力下降程度輕、中、重記分為1分、2分、3分；⑤觀察動(dòng)物有無自發(fā)不停地向一側(cè)轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)，出現(xiàn)者記2分。以上4項(xiàng)滿分12分，分?jǐn)?shù)越高，則損傷越重。

2.病理形態(tài)學(xué)改變（光鏡和電鏡） 于造模后1天斷頭取腦，迅速進(jìn)行肉眼觀察后，去除嗅腦、小腦、低位腦干，在視交叉前后等分間隔2mm連續(xù)做6個(gè)腦冠狀切片，將其放入提前預(yù)熱的37℃，2%TTC生理鹽水溶液中，保溫15分鐘后翻片，染色30分鐘，染色后白色區(qū)域?yàn)槟X梗死部，腦片再浸入10%甲醛固定，石蠟包埋，HE染色光鏡觀察。造模后1天時(shí)，先在實(shí)驗(yàn)側(cè)腦表面滴加4%戊二醛固定液后，于頂葉皮質(zhì)病灶部取1mm腦組織，浸泡電鏡固定液中，制備超薄切片，在透射電鏡下觀察腦組織超微結(jié)構(gòu)的改變。

3.腦組織中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物及自由基和抗氧化系統(tǒng)檢測(cè) 如丙二醛（MDA）、一氧化氮(NO）和超氧化物歧化酶(SOD)等含量變化。

【模型特點(diǎn)】模型組造模清醒后出現(xiàn)神經(jīng)行為學(xué)改變，TTC染色腦冠狀切面出現(xiàn)明顯的梗死灶，HE染色及透射電鏡可見神經(jīng)元細(xì)胞呈不同程度的缺血性血栓形成的典型改變、腦組織中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物及自由基增加和抗氧化酶活性變化。)

【應(yīng)用范圍】適于急性腦血栓形成機(jī)制與康復(fù)理療等防治措施療效評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)研究?！咀⒁馐马?xiàng)】避免手術(shù)中出血過多等副損傷；實(shí)驗(yàn)操作者對(duì)光照損傷的防護(hù)。

【模型評(píng)估】在冷光源條件下建立的大鼠大腦中動(dòng)脈血栓模型穩(wěn)定可靠,其神經(jīng)行為學(xué)、腦組織病理變化對(duì)臨床研究具有指導(dǎo)意義。

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