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激光共聚焦顯微鏡(LSCM)的工作原理和應(yīng)用

2023-04-22 17:33 作者:sousepad材料檢測  | 我要投稿

激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)簡介:

LSCM是一種高科技顯微鏡;它是在熒光顯微鏡成象的基礎(chǔ)上加裝激光掃描裝置,使用紫外光或可見光激發(fā)熒光探針,從而得到細胞或組織內(nèi)部微細結(jié)構(gòu)的熒光圖像,成為形態(tài)學(xué)、分子細胞生物學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、藥理學(xué)、遺傳學(xué)等領(lǐng)域新一代強有力的研究工具。

激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)應(yīng)用范圍:

激光掃描共聚焦顯微鏡也是活細胞的動態(tài)觀察、多重免疫熒光標(biāo)記和離子熒光標(biāo)記觀察的有力工具。不僅可對活的或固定的細胞及組織進行無損傷的“光學(xué)切片”,進行單標(biāo)記或雙標(biāo)記細胞及組織標(biāo)本的熒光定性定量分析;還可以用于活細胞生理信號,離子含量的實時動態(tài)分析監(jiān)測,粘附細胞的分選,細胞激光顯微外科和光陷阱技術(shù)等。可以無損傷的觀察和分析細胞的三維空間結(jié)構(gòu)。

激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)的基本組成:

l 光學(xué)顯微鏡部分

l 激光發(fā)射器

l 掃描裝置

l 光檢測器

l 計算機系統(tǒng)(包括數(shù)據(jù)采集,處理,轉(zhuǎn)換,應(yīng)用軟件)

l 圖像輸出設(shè)備

激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)對生物樣品觀察的優(yōu)越性:

l 連續(xù)掃描 、三維

l 離子熒光標(biāo)記

l 同時多重物質(zhì)標(biāo)記

激光共聚焦顯微鏡由于采用共聚焦與光學(xué)掃描系統(tǒng)結(jié)合的方式,即便是尖銳的輪廓或者無法觸及的高縱橫比零件也能全面進行分析。在測量表面粗糙度上,即便樣品為弧形表面,也能完成直線及表面粗糙度的測量。在測量膜層厚度方面,其膜厚功能可以通過非破壞性方式來捕捉和分析膜層信息。使用激光掃描共聚焦顯微鏡時會涉及以下幾個信息:①物鏡倍率:它會影響到觀察到的圖像分辨率,物鏡倍數(shù)越大所觀察到的圖像分辨率越高。②掃描模式:應(yīng)根據(jù)樣品的相貌狀態(tài)和所需的量測參數(shù)來設(shè)置的,當(dāng)非透明樣品需要觀察表面輪廓時一般采用的是表面輪廓掃描模式,而透明樣品時將選擇透明物上表面掃描模式。③ND濾鏡:它改變的是樣品反射回來光束能量的濾過情況,ND濾鏡改變也會影響掃描的時間。④精準(zhǔn)度:它改變的是激光共聚焦顯微鏡的量測精度模式,超精細設(shè)定會比標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定更加符合樣品的表面形貌特征,但是超精細的掃描的時間會比標(biāo)準(zhǔn)的長。⑤Z軸節(jié)距:它是改變在激光共聚掃描的時候每一個層面的相隔距離。

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