穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株是指在某一細(xì)胞株中過表達(dá)或抑制某一特定基因的細(xì)胞系。通過將特定基因的DNA或shRNA構(gòu)建到重組載體上，借助慢病毒系統(tǒng)或轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)將目的基因的表達(dá)框?qū)胨拗骷?xì)胞并整合到染色體上，以實(shí)現(xiàn)目的基因長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定表達(dá)。對(duì)比瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法，慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)法和轉(zhuǎn)座子穩(wěn)轉(zhuǎn)法能有效提高轉(zhuǎn)染效率，進(jìn)一步提高目的基因的表達(dá)效率。

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什么時(shí)候需要使用到穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株呢？

1.?當(dāng)需要在目的細(xì)胞中長(zhǎng)時(shí)間研究某一基因功能時(shí)，構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株可持續(xù)有效保證基因的表達(dá)水平，減少反復(fù)轉(zhuǎn)染，避免成本和人力浪費(fèi)；

2.?通過誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)操控基因表達(dá)，可以讓目的基因在特定時(shí)空表達(dá)，例如：研究管家基因或者致死基因功能時(shí)，誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)是極佳的選擇；

3.?當(dāng)目的細(xì)胞中蛋白功能持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)，瞬時(shí)抑制無法有效去除已經(jīng)表達(dá)的蛋白功能，構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)的敲降細(xì)胞株，可以穩(wěn)定維持基因低水平表達(dá)或不表達(dá)，增加實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和真實(shí)性；

4.?當(dāng)需要進(jìn)行藥物篩選、構(gòu)建重組蛋白、生產(chǎn)制備抗體等都需要可以選擇穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。

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穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株pool和單克隆如何選擇？

目前對(duì)于穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的運(yùn)用，國內(nèi)主要仍集中在混合細(xì)胞階段，利用病毒感染細(xì)胞、藥物篩選后，可初步用于實(shí)驗(yàn)分析，其優(yōu)點(diǎn)是能快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)趨勢(shì)。若實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，需要不間斷地添加藥物篩選，以維持混合細(xì)胞池中，高表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的比例，實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)隨著穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞量占比的變化而有所波動(dòng)，數(shù)據(jù)穩(wěn)定性與有效性難以保證，不僅難發(fā)高分文章，可能最后你的實(shí)驗(yàn)結(jié)論還會(huì)來個(gè)“兩極反轉(zhuǎn)”。

如果將混合細(xì)胞池進(jìn)行單克隆分選，可得到不同過表達(dá)量的細(xì)胞系，后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究將擁有不同表達(dá)水平單克隆細(xì)胞株的選擇。由單一細(xì)胞形成的細(xì)胞團(tuán)，基因表達(dá)量相對(duì)均勻，利于維持穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的穩(wěn)定性和均一性，減少重復(fù)實(shí)驗(yàn)的波動(dòng)性。這些單克隆細(xì)胞株是研究基因調(diào)控關(guān)系、蛋白質(zhì)功能和研究生物試劑特異性的重要工具。因此源井生物為了保證向客戶交付能挑單克隆的穩(wěn)轉(zhuǎn)株，一直秉承著“單克隆級(jí)別”穩(wěn)轉(zhuǎn)株的服務(wù)準(zhǔn)則：細(xì)胞來源權(quán)威，精研最優(yōu)轉(zhuǎn)染培養(yǎng)體系與最佳MOI值，獨(dú)家生長(zhǎng)體系顯著提高單克隆生長(zhǎng)速度與形成率，輕松挑取單克??！可復(fù)制鏈接了解詳情>>https://www.ubigene.com/service/cell/overexpression.html

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案例1：過表達(dá)單克隆篩選在耐藥細(xì)胞株中的應(yīng)用研究

化學(xué)藥物治療癌癥時(shí)，最常見的難題是產(chǎn)生耐藥性。p -糖蛋白(P-gp)是由MDR1基因編碼的ATP結(jié)合盒(ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。過表達(dá)P-gp會(huì)導(dǎo)致活性藥物向外轉(zhuǎn)運(yùn)增加，降低其在細(xì)胞質(zhì)中的有效濃度和細(xì)胞毒性效果，從而引發(fā)多藥耐藥性（MDR）。Caveolin-1是一種小泡外膜蛋白，能與H-ras、蛋白激酶Cα、G蛋白、eNOS、src家族酪氨酸激酶和EGFR等多種蛋白相互作用，參與調(diào)控信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。癌癥、糖尿病、阿爾茨海默病、心血管疾病和肌肉萎縮癥等多種病癥中可見Caveolin-1蛋白的異常的表達(dá)。為了探究caveolin-1與P-gp相關(guān)的分子機(jī)制，在多藥耐藥株Hs578T/Dox乳腺腺癌細(xì)胞中過表達(dá)caveolin-1，并通過單克隆篩選，獲得持續(xù)高表達(dá)caveolin-1的單克隆細(xì)胞株。挑選caveolin-1表達(dá)量最高的單克隆細(xì)胞株進(jìn)行后續(xù)研究，通過檢測(cè)單克隆細(xì)胞中P-gp和MDR1基因的變化，比較細(xì)胞的耐藥和P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)活性發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)caveolin-1的單克隆通過抑制MDR1基因的表達(dá)來降低耐藥。

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案例2：?jiǎn)慰寺》€(wěn)轉(zhuǎn)株在疫苗研發(fā)中的應(yīng)用

中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)是從一名來自沙特阿拉伯急性肺炎伴腎功能衰竭的患者體內(nèi)分離得到，是繼SARS-CoV之后出現(xiàn)的一類高致病性冠狀病毒。MERS-CoV以CD26作為受體感染宿主，能引起人體多種器官感染。MERS-CoV刺突蛋白存在受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域（RBD），MERS-CoV RBD在宿主受體結(jié)合、膜融合和細(xì)胞進(jìn)入等方面發(fā)揮著重要作用，因此該結(jié)構(gòu)域也是疫苗研發(fā)的重要關(guān)注點(diǎn)。在小鼠和兔子模型中，重組人源的Fc片段和MERS-CoV RBD殘基可提高M(jìn)ERS-CoV抗體的表達(dá)量，并對(duì)近20株人類和駱駝的中東呼吸綜合征冠狀病毒株表現(xiàn)出強(qiáng)有力的活性。該類抗體主要是通過阻斷中東呼吸綜合征冠狀病毒株RBD與細(xì)胞表面受體DPP4的結(jié)合從而阻止侵入細(xì)胞。疫苗初期的研究和制備，可通過HEK293細(xì)胞系表達(dá)和純化得到。大量制備疫苗時(shí)則需要一株能穩(wěn)定大量表達(dá)MERS-CoV蛋白疫苗抗原的細(xì)胞株。將過表達(dá)MERS-CoV蛋白的susCHO進(jìn)行單克隆培養(yǎng)，通過ELISA篩選鑒定到一株MERS-CoV蛋白表達(dá)量最高的單克隆細(xì)胞。通過比較單克隆susCHO細(xì)胞與pool-susCHO細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線發(fā)現(xiàn)，兩株細(xì)胞在培養(yǎng)的第7天時(shí)間達(dá)到最大的細(xì)胞量，細(xì)胞密度分別是?8×106?cells/mL和?7×106?cells/mL(圖A)。將培養(yǎng)7天的培養(yǎng)基上清進(jìn)行SDS-PAGE檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，每1L的培養(yǎng)基上清中，單克隆susCHO細(xì)胞比pool-susCHO的上清中的濃度多表達(dá)32mg MERS-CoV蛋白。由此可見，通過單克隆分選可挑選細(xì)胞狀態(tài)最佳，蛋白表達(dá)量最合適的克隆，通過單克隆化的克隆能顯著提高抗體的產(chǎn)量，提高經(jīng)濟(jì)效益。

總之源井能提供“單克隆級(jí)別”穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建服務(wù)，從細(xì)胞采購源頭到細(xì)胞培養(yǎng)體系，依靠最全MOI數(shù)據(jù)庫、最優(yōu)轉(zhuǎn)染培養(yǎng)體系、細(xì)胞來源權(quán)威細(xì)胞庫和獨(dú)家單克隆生長(zhǎng)體系，給您最安心的穩(wěn)轉(zhuǎn)株服務(wù)！可復(fù)制鏈接了解詳情>>https://www.ubigene.com/service/cell/overexpression.html

源井生物是一家專注于細(xì)胞基因編輯的企業(yè)，可在全球范圍內(nèi)提供優(yōu)質(zhì)的基因編輯細(xì)胞、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株、病毒包裝等相關(guān)服務(wù)，以及近3000種KO細(xì)胞現(xiàn)貨庫，基因敲除試劑盒等基因編輯相關(guān)產(chǎn)品，了解更多詳情歡迎咨詢我們！