Jackson公司直接和間接蛋白質印跡前言：

蛋白質印跡是一種強大的技術，它使用抗體來檢測通過電泳分離后固定在印跡膜上的蛋白質。該技術可以直接或間接執(zhí)行。每種方法都可以根據實驗要求提供優(yōu)勢。

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一旦通過凝膠電泳分離蛋白質并轉移到印跡膜上，就可以通過一個或兩個步驟進行蛋白質印跡。

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Jackson公司：直接——一步法

在直接檢測方法中（圖?1 (A)），在單個孵育步驟后，直接與報告酶或熒光染料偶聯的一抗用于檢測印跡膜上的蛋白質抗原。雖然這種一步法速度更快，但并未廣泛使用。圖1（B）說明了直接偶聯一抗的問題之一，報告分子可以封閉一抗的抗原結合區(qū)，阻礙對抗原的良好識別，導致靈敏度降低。 過量的初級可以補償這種影響，但可能導致重現性差和背景增加。

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Jackson公司：間接——兩步法

Western blotting的兩步間接檢測方法避免了對抗原檢測的干擾。未標記的一抗與結合在印跡膜上的抗原形成復合物。洗滌后，印跡與偶聯有報道酶或熒光團的二抗一起孵育。多個二抗與一抗上的表位結合，形成標記的抗原-抗體復合物（圖?1(C)）。盡管間接方法需要一個額外的洗滌和孵育步驟，但與直接方法相比，它具有許多優(yōu)勢，包括信號放大和靈活性。

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下表詳述了直接和間接檢測方法的優(yōu)缺點。它們適用于蛋白質印跡，但也可能與其他技術相關，例如?IHC/ICC、ELISA?和流式細胞術。

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備注：

圖?1：(A)?直接偶聯的一抗與結合在膜上的抗原結合。(B)?直接偶聯的一抗與與膜結合的抗原結合較差，因為報告酶或熒光團可以偶聯到抗原結合區(qū)域并降低抗體對其靶標的親和力。使用輔助消除了這一點。(C)?間接方法?-?多個偶聯二抗與未偶聯一抗結合。

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表?1：直接和間接西方印跡方法的優(yōu)缺點。

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參考文獻：

Alberts B et al (1994) Molecular biology of the Cell. 3rd Ed. Garland press. London

Roitt et al (2005) Immunology. 6th Ed. Mosby. Spain

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Jackson公司專注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務領域覆蓋各大學科研所和醫(yī)院里的動物研究以及生物醫(yī)學研究機構的科學家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的產品與服務。