大家在做分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，難以避免的問題就是污染問題，尤其在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，一小點(diǎn)點(diǎn)污染就會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，那么這個(gè)污染問題是否讓你焦頭爛額呢？接下來，小編帶你一起認(rèn)識(shí)一下污染之一的氣溶膠污染。

?什么是氣溶膠

氣溶膠(aerosol)是由固體或液體小質(zhì)點(diǎn)分散并懸浮在氣體介質(zhì)中形成的膠體分散體系，又稱氣體分散體系。其分散相為固體或液體小質(zhì)點(diǎn)，大小為0.01-100微米。這些顆粒對(duì)于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)影響很大，其中對(duì)PCR的影響一直是讓實(shí)驗(yàn)室人員頭痛的一件事。PCR核酸檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，對(duì)于診斷起著重要作用，但是稍不留神，在操作過程中容易受到氣溶膠污染，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。

氣溶膠污染的產(chǎn)生

PCR產(chǎn)物的污染主要發(fā)生在產(chǎn)物的分析階段，極微量的PCR產(chǎn)物就會(huì)造成分析污染。此外，在空氣與液體摩擦?xí)r也極易形成氣溶膠，所以我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中打開ep管、離心管的瞬間；移液管取液、混勻的瞬間；打噴嚏、咳嗽、說話的時(shí)候等都會(huì)造成氣溶膠污染。

?氣溶膠污染的確定

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過以下途徑及時(shí)發(fā)現(xiàn)污染?：采用每次檢測(cè)過程至少3個(gè)陰性對(duì)照隨機(jī)置于臨床樣本中間參與提取全過程；每天對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣進(jìn)行采樣監(jiān)測(cè)；空氣監(jiān)測(cè)范圍應(yīng)至少應(yīng)包括樣本制備區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)；定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、門把手、儀器設(shè)備表面進(jìn)行取樣監(jiān)測(cè)。

如何減輕或避免氣溶膠污染

嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)室功能分區(qū)

原則上檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。各區(qū)域在物理空間上應(yīng)當(dāng)是相互獨(dú)立的。傳遞窗滿足密封性要求，不能有空氣的直接相通。各項(xiàng)檢測(cè)工作應(yīng)嚴(yán)格按相應(yīng)規(guī)定在各自的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，嚴(yán)禁在樣本制備區(qū)配制試劑。各區(qū)的功能是：

試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的制備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。

樣本制備區(qū)：核酸提取及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管等。

擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)：核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析。

確保實(shí)驗(yàn)室人、物及空氣單向流動(dòng)

核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的人、物及空氣流向按照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→樣本制備區(qū)→擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)，防止擴(kuò)增產(chǎn)物隨人流、物流及空氣進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。空氣流向應(yīng)按照從試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→樣本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)安全管理

應(yīng)當(dāng)在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，并應(yīng)在生物安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的基礎(chǔ)上，采取適當(dāng)?shù)膫€(gè)體防護(hù)措施，包括手套、口罩和隔離衣等。應(yīng)使用75%酒精進(jìn)行桌面、臺(tái)面及地面消毒，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行清潔，消除可能的核酸污染。

①實(shí)驗(yàn)室空氣清潔。實(shí)驗(yàn)室每次檢測(cè)完畢后，可采用房間固定和/或可移動(dòng)紫外燈進(jìn)行紫外照射2小時(shí)以上。必要時(shí)可采用核酸清除劑等試劑清除實(shí)驗(yàn)室殘留核酸。

②工作臺(tái)面清潔。每天實(shí)驗(yàn)后，使用75%酒精進(jìn)行臺(tái)面、地面清潔。

③生物安全柜消毒。實(shí)驗(yàn)使用后的耗材廢棄物放入醫(yī)療廢物垃圾袋中，包扎后使用75%酒精噴灑消毒其外表面。手消毒后將垃圾袋帶出生物安全柜放入實(shí)驗(yàn)室廢棄物轉(zhuǎn)運(yùn)袋中。試管架、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、移液器等使用75%酒精進(jìn)行擦拭。隨后關(guān)閉生物安全柜，紫外燈照射30分鐘。

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