一、調(diào)節(jié)pH

通常采用三種方法調(diào)節(jié)鱟試驗反應(yīng)混和液的pH。

①使用高靈敏度的鱟試劑，如λ為0.06~0.03EU/ml的鱟試劑，使得檢品的最大稀釋倍數(shù)（MVD）增大，從而減弱或消除檢品的pH因素對檢查的干擾。

②用緩沖液制備樣品稀釋液，使檢品的pH達到適合反應(yīng)的范圍，這樣使用較低靈敏度（λ為0.25 EU/ml）的鱟試劑也可以檢查這類檢品。

③用酸、堿或緩沖液來調(diào)節(jié)pH。張毓梅等[1]選取了38個品種，其pH范圍較寬，位于2~12之間，結(jié)果表明，pH 4 ~10的供試液由于鱟試劑本身具有一定緩沖能力，因此對檢測結(jié)果無干擾，而 pH＜4或pH＞10的供試液假陰性結(jié)果出現(xiàn)的幾率比較多，但用0. 1 mol/L的HCl或NaOH溶液調(diào)整供試液pH在6~8內(nèi)，用靈敏度λEU/ml鱟試劑進行干擾試驗，其抑制現(xiàn)象消失。

?二、調(diào)節(jié)金屬離子

最好的消除因鱟合作用而導(dǎo)致離子不足的方法是計算二價離子需要量，然后補充等摩爾無熱原的二價離子鹽。但常用的方法是通過稀釋來消除絡(luò)合作用。如血液保存液的主要成分是枸櫞酸和枸櫞酸鈉，由于枸櫞酸根離子對凝膠法有干擾，因此王洪等[2]采用稀釋法對3種血液保存液進行了干擾試驗，結(jié)果Ⅰ號抗凝液和血液保存液Ⅱ（ACD-B）稀釋44倍，紅細(xì)胞保存液（MAP）)稀釋22倍后，相對應(yīng)地使用0.125 EU/ml和0.25EU/ml鱟試劑，可以排除供試品的干擾。

美國FDA的鱟試劑檢查準(zhǔn)則允許使用輔助劑來消除鱟試劑檢查的干擾因素。稀釋劑（Ⅰ）是用于枸櫞酸鹽類抗凝劑及血液保養(yǎng)液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的一種輔助劑，它含有一定濃度的二價離子，可以飽和枸櫞酸鹽的鰲合反應(yīng)，維持鱟試劑的正常靈敏度，并有較佳的緩沖能力，用本稀釋劑（Ⅰ）輔助劑作抗凝劑、血液保養(yǎng)液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，可以使用常用靈敏度的鱟試劑，無需對檢品作較高的稀釋。

喹諾酮類藥物結(jié)構(gòu)中3，4位為羧基和酮炭基，極易和金屬離子如鈣、鐵，鎂，鋅等形成鱟合物，導(dǎo)致了TAL靈敏度下降。加入適量的 Mg2+（稀釋劑—Ⅰ），以補充供試品與鱟試劑混合后鰲合的部分來消除干擾作用[3]。

人免疫球蛋白（IVIG）對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法有強烈的抑制作用，單純用簡單稀釋和調(diào)整pH法無法消除干擾，用稀釋劑（Ⅰ）對IVIG作4倍以上稀釋，可以消除其對TAL凝集反應(yīng)的干擾，可能是IVIG中的球蛋白分子與TAL的二價陽離子結(jié)合，而稀釋劑（Ⅰ）含有一定濃度的二價陽離子，可維持TAL正常靈敏度所需的二價陽離子，并且稀釋劑（Ⅰ）有較強的 pH 緩沖能力，能使反應(yīng)介質(zhì)保持反應(yīng)所需的最佳pH[4]。但要注意，二價離子加入試劑會增加鱟試劑靈敏度，因此調(diào)整含有Ca2+?、Mg2+等二價鹽的藥品離子水平時應(yīng)特別注意，避免增強內(nèi)毒素反應(yīng)。

參考文獻：

[1] 張毓梅,代曉靜,鄭長眷,等.供試品溶液的pH對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法結(jié)果的影響[J].中國藥學(xué)雜志.2007,42(8):621-623

[2] 王洪,王欣,張曉寒,等.BET法檢測3種血液保存液細(xì)菌內(nèi)毒素的效果觀察[J].中國輸血雜志,2007,20(1):49-50

[3] 韋群,粱丹,陳瑜.喹諾酮類注射液細(xì)菌內(nèi)毒索檢查方法的研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報.2004,20(1):24-27

[4] 郭采平,張劍平,黃曉華.靜注入免疫球蛋白細(xì)菌內(nèi)毒索檢查方法的建立[J].中國生物工程雜志,2004,24(5):84-86 [J].

免責(zé)聲明：

本文節(jié)選自：《凝膠法細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的干擾因素及消除》，文章作者：何進。如有侵權(quán)，請聯(lián)系刪除，謝謝！