基于J2的雙鏈RNA ELISA試劑盒—無需額外驗(yàn)證
J2已被用于闡明抗病毒反應(yīng)是如何啟動(dòng)的,病毒采取了哪些反策略來避免它們,并通過對(duì)病毒核酸復(fù)制位點(diǎn)進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)定位研究來探索病毒生命(Welsch等人,2009&Knoops等人,2011)。J2也被推薦作為診斷工具,以檢測(cè)未確定的病原體本質(zhì)上是細(xì)菌還是病毒(Richardson等人,2010)。最近,J2也被用于監(jiān)測(cè)體外合成的mRNA制劑中dsRNA的去除,這些制劑可能在基因治療中具有潛在的用途(Kariko等人,2011)。J2已成功用于各種免疫捕獲方法,例如ELISA中。
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艾美捷基于J2的雙鏈RNA ELISA試劑盒?#KBBA56:
校準(zhǔn)器范圍:0?納克/毫升?- 200?納克/毫升
敏感性:~1.5?納克/毫升
樣品類型:細(xì)胞培養(yǎng)上清液和生物制劑
運(yùn)輸條件:2 - 8?攝氏度
檢測(cè)方法:450 nm?比色法
用法:僅供研究使用
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基于J2的雙鏈RNA ELISA試劑盒檢測(cè)原理:
KRIBIOLISA?雙鏈?RNA?(dsRNA)?ELISA?采用定量夾心酶免疫測(cè)定技術(shù)。它基于使用兩種雙鏈RNA(dsRNA)特異性單克隆抗體,可以靈敏和選擇性地檢測(cè)dsRNA分子(>=40 bp),而不受其核苷酸組成和序列的影響。dsRNA?(J2) 抗體預(yù)包被到微孔上。將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品移液到微孔中,并由捕獲抗體結(jié)合。然后,將HRP(辣根過氧化物酶)偶聯(lián)的抗dsRNA?(K1)移液并孵育。洗滌微孔以去除任何非特異性結(jié)合后,將即用型底物溶液(TMB)添加到微孔中,顏色與樣品中dsRNA的量成比例發(fā)展。然后通過添加終止溶液停止顯色。在450nm處測(cè)量吸光度。
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基于J2的雙鏈RNA ELISA試劑盒檢測(cè)程序:
使用前將所有試劑置于室溫。強(qiáng)烈建議所有控件和示例應(yīng)重復(fù)或一式三份運(yùn)行。
在各自的孔中加入100ul制備的陽性對(duì)照/標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。
密封板并在?37*C?下孵育?120?分鐘。
吸出并用洗滌緩沖液(4X)洗滌板1次,并通過在吸收紙上用力倒置板來吸干殘留緩沖液。擦拭微量滴定孔外底部的任何液體,因?yàn)槿魏螝埩粑锒紩?huì)干擾讀數(shù)步驟。
向所有孔中加入100ul的dsRNA特異性K1檢測(cè):HRP偶聯(lián)物。
密封板并在?37*C?下孵育?60?分鐘。
重復(fù)洗滌步驟(4)。
在每個(gè)孔中加入100ul的TMB底物。
將微孔板在室溫下在黑暗中孵育30分鐘。請(qǐng)勿搖晃,否則可能會(huì)導(dǎo)致更高的背景和更差的精度。陽性孔應(yīng)變成藍(lán)色。
移出?100 ul?的停止溶液。井的顏色應(yīng)該從藍(lán)色變成黃色。11.用酶標(biāo)儀讀取450nm處的吸光度。