藻紅蛋白是從紅藻中分離純化的，具有較強(qiáng)的熒光性、良好的吸光度和較高的量子產(chǎn)率。它在可見光譜區(qū)具有很寬的激發(fā)和發(fā)射范圍。通過使用傳統(tǒng)的標(biāo)記方法，它可以很容易地與生物素、抗生物素和各種單克隆抗體結(jié)合形成熒光探針，用于抗體熒光標(biāo)記，如熒光顯微鏡、熒光免疫分析、雙或多色熒光分析、癌癥細(xì)胞表面抗原檢測(cè)、流式細(xì)胞術(shù)熒光測(cè)量、，以及診斷和生物工程技術(shù)，例如體內(nèi)成像應(yīng)用?；罨脑寮t蛋白很容易與抗體和其他蛋白質(zhì)結(jié)合，而不需要化學(xué)交聯(lián)劑。這些高度純化的藻紅蛋白在結(jié)合后保持其光譜特征。用4-（N-馬來(lái)酰亞胺甲基）環(huán)己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺基（SMCC）處理活化的hycoerythrin，該琥珀酰胺基與賴氨酸殘基反應(yīng)，使馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)與偶聯(lián)伴侶蛋白的游離硫醇反應(yīng)。當(dāng)與含硫醇的靶標(biāo)混合時(shí)，可以直接偶聯(lián)，無(wú)需進(jìn)一步預(yù)處理。

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艾美捷預(yù)活化的PE [R-藻紅蛋白]：

Cat #: B-CHM305

Size: 1 mg

Storage: Store at 4°C, protected from light

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預(yù)活化的PE [R-藻紅蛋白]特性：

形式：液體

光譜特性：Ex/Em=450-500納米/575±5納米

純度：Amax/A280>5.0

運(yùn)輸和儲(chǔ)存

儲(chǔ)存條件：4°C避光保存。不要凍結(jié)。

穩(wěn)定性：在適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存條件下穩(wěn)定至少6個(gè)月。

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預(yù)活化的PE [R-藻紅蛋白]使用說明：

1.抗體修飾

1） 將抗體修飾試劑（DTT/TCEP）溶于ddH20中，制備2mg/ml抗體修飾緩沖液。

2） 使用PBS緩沖液將待標(biāo)記抗體的濃度（純度>90%）調(diào)節(jié)至約5-10 mg/ml。向每毫克抗體中加入10μl抗體修飾緩沖液，輕輕混合。在室溫下攪拌混合物60-90分鐘。

3） 反應(yīng)完成后，將混合物轉(zhuǎn)移到離心過濾管中，并加入MES緩沖液。離心過濾器多次以除去過量的抗體修飾緩沖液。過濾器中收集的溶液是經(jīng)修飾的抗體，應(yīng)將其調(diào)節(jié)至1-5mg/ml的濃度。

2.活化的R-藻紅蛋白與抗體的結(jié)合

1） 使用MES緩沖液將活化的R-藻紅蛋白的濃度調(diào)節(jié)至5 mg/ml。為了獲得R-PE的準(zhǔn)確重量，我們建議使用R-PE的消光系數(shù)進(jìn)行測(cè)量（[R-PE]=0.1245×

A565，其中[R-PE]是以mg/ml為單位的濃度，A565是565nm處的吸光度，優(yōu)選在0.3-0.8的范圍內(nèi)）。

2） 將修飾的抗體與活化的R-藻紅蛋白以1:3的質(zhì)量比混合（每mg修飾的抗體3 mg活化的R藻紅蛋白）。在室溫下避光反應(yīng)2小時(shí)。

3） 將NEM溶解在無(wú)水二甲基亞砜（DMSO）中，制備12.5 mg/ml溶液（0.1 M）。在步驟2）的反應(yīng)混合物中，每毫克抗體加入5μl-NEM溶液，以阻斷任何剩余的活性基團(tuán)。

4） 將步驟3）中的溶液轉(zhuǎn)移到離心過濾管中，并通過重復(fù)離心去除阻塞緩沖液。

5） 將標(biāo)記的抗體分成等分，添加適當(dāng)?shù)姆栏瘎⒃?20°C下儲(chǔ)存以備將來(lái)使用。

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