特發(fā)性血小板減少性紫癜動物模型【動物實(shí)驗外包】

【造模機(jī)制】特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)是臨床常見的免疫疾病，主要是由于體內(nèi)產(chǎn)生大量血小板相關(guān)的自身抗體(PAIg)，PAIg 同血小板結(jié)合，引起血小板的破壞增多。通過免疫法制備實(shí)驗動物的自身抗體（PAIg)，注入自身抗體后，誘發(fā)實(shí)驗動物的特發(fā)性血小板減少性紫癜發(fā)生。

【造模方法】選用 BALB/c小鼠、豚鼠。實(shí)驗方法：

1.抗原的制備?BALB/c小鼠，8周齡，18~22g，雌雄各半；摘眼球或眶靜脈采血，ED-TA-Naz 抗凝；梯度離心分離血小板并洗滌，調(diào)整濃度為(1~2)×10°/L。

2.豚鼠抗 BALB/c小鼠血小板血清(GP-APS)制備?取以上血小板懸液分別與等量的弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑混勻，制成乳白色油包水狀的抗原。第1周取含弗氏完全佐劑的抗原分別注射于豚鼠的后足掌、背部皮下及腹股溝；第2周、3周、5周取含弗氏不完全佐劑的抗原分別注射于豚鼠后足掌、背部皮下及腹股溝，前后共4次注射，每次注射至少5點(diǎn)，每點(diǎn)100μ1；第6周取豚鼠不抗凝全血,1800r/min,離心 10分鐘后取上清液，即為豚鼠抗小鼠血小板抗血清（GP-APS），-20℃冰箱儲存?zhèn)溆谩?/p>

3.抗體效價的檢測?采用簡單的瓊脂擴(kuò)散法，自制 10g/L 瓊脂平板,用打孔器打成梅花形孔環(huán)，中間孔滴加免疫濃度血小板懸液，周圍孔滴加不同濃度的抗血清，37℃溫箱孵育24小時觀察沉淀弧，確定最佳血清稀釋度。

4.急性短期 ITP模型于 BALB/c 小鼠腹腔內(nèi)一次性注射抗血清 100μ1。

5.慢性持續(xù)ITP模型分別在第1天、3天、5天、7天、9天、11天、13天于小鼠腹腔注射抗血清，每次100μl，在第15天取材。

【模型特點(diǎn)】BALB/c小鼠注射抗血清后，皮下可見散在出血點(diǎn)、瘀斑；血小板在短時間內(nèi)大幅度下降；PAIgG檢測陽性；骨髓巨核細(xì)胞數(shù)量在急性實(shí)驗中有輕度增加，慢性實(shí)驗明顯增加。

【應(yīng)用范圍】本模型可作為研究特發(fā)性血小板減少性紫癜發(fā)病機(jī)制及其防治藥物的藥效學(xué)研究。

【注意事項】

1.分離出血小板時避免混有紅細(xì)胞?否則免疫豚鼠所得的抗血清中會含有大量的抗紅細(xì)胞抗體，再注射造模動物會引起血清病而導(dǎo)致死亡。

2.血小板懸液與弗氏佐劑必須混合完全，乳化充分?否則免疫不易成功。免疫動物注射部位易感染，應(yīng)注意局部消毒。

3.慢性ITP模型的建立應(yīng)注意?首次注射的量應(yīng)稍大，并且連續(xù)注射若干次后，由于小鼠機(jī)體內(nèi)也會產(chǎn)生抗 APS的抗體。如果停止注射抗血清后3天左右小鼠的血小板就會逐漸恢復(fù)正常，隨后會代償性大幅度反彈。

【模型評估】本模型結(jié)果穩(wěn)定，方法簡單，容易復(fù)制。

文章轉(zhuǎn)載于北京吉田生物科技有限公司?可承接?動物實(shí)驗外包