DH82 犬巨噬細(xì)胞/狗腎惡性組織細(xì)胞增生癥細(xì)胞 培養(yǎng)傳代信息介紹
細(xì)胞介紹
源自一只患有惡性組織細(xì)胞增生癥的十歲雄性金毛獵犬。DH82細(xì)胞具有類似巨噬細(xì)胞形態(tài)，并能吞噬乳膠顆粒。DH82細(xì)胞具有Fc-γ受體陽(yáng)性，F(xiàn)c-μ和C3b受體陰性；DH82細(xì)胞不生成IL-1。
基本信息
細(xì)胞別稱：DH-82;DH 82
細(xì)胞來(lái)源：惡性組織細(xì)胞增生
細(xì)胞形態(tài)：巨噬細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
安全等級(jí)：BSL1
包裝規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
推薦換液：2~3次/周
傳代比例：1:3-1:4
倍增時(shí)間：~26 hours
保藏機(jī)構(gòu)：ATCC;CRL-10389
培養(yǎng)保存
培養(yǎng)體系：EMEM(MEM+NEAA)+15% FBS(Heat Inactivated)
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%；溫度：37℃
凍存條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+40%FBS(TS500)，液氮保存
傳代步驟
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次；
加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化；
按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻；
收到細(xì)胞后首次傳代推薦將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:4的比例進(jìn)行。
凍存步驟
細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)；
4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x10(6)/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)；
將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細(xì)胞用途
僅供科研使用。
