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PCR實驗室(基因擴增實驗室)污染分析及應(yīng)急處理方法

2023-04-28 09:08 作者:健微講堂  | 我要投稿

PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng),能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量,其精確度高達納米級別。在實際實驗過程中有哪些問題需要注意的,一起來看看吧~

一、PCR實驗室的污染來源有哪些?

1.樣本間交叉感染:收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴導(dǎo)致外溢;不同樣本移液時忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖;移液器等實驗器具及耗材未及時消毒滅菌;不同樣本同時開蓋或樣本劇烈震蕩、反復(fù)吹吸導(dǎo)致氣溶膠形成擴散,相互交叉污染。?

2.實驗試劑污染:主要是在 PCR 組分試劑加樣過程中,由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。加樣過程中,因為PCR試劑對溫度十分敏感,需要通過冰浴使得PCR試劑和PCR板/管處于0℃,但這個過程也充滿污染風(fēng)險。

3.擴增產(chǎn)物污染:大量拷貝的產(chǎn)物泄漏或擴增后的PCR反應(yīng)管意外開蓋,這是PCR反應(yīng)中最主要、最常見的污染問題。因為PCR產(chǎn)物拷貝量大,遠遠高于PCR檢測數(shù)個拷貝的極限,所以極微量的PCR產(chǎn)物污染,就可形成假陽性。

4.克隆質(zhì)粒污染:作為陽性質(zhì)控品的克隆質(zhì)粒外溢。??

二、PCR實驗室污染應(yīng)急處理方法,小貼士!

1、若核酸樣本溢出:

立即用布或紙巾覆蓋,由外圍向中心傾倒10%的次氯酸消毒劑,約30分鐘后,清除污染物品,再用次氯酸消毒劑擦拭,并用75%酒精噴灑,移動紫外車定點照射1小時。

2.其他不明情況污染:

1、暫停所有實驗操作;
2、清理實驗室內(nèi)所有物品,尋找污染來源;
3、加大實驗室的通風(fēng);
4、對實驗室內(nèi)所有表面(臺面、地面及墻面) 進行消毒;
5、75%酒精空中噴霧;
6、開啟紫外消毒裝置,延長紫外照射時間(4小時以上);
7、以上措施每日進行,直至污染消除;用新試劑及確認無污染的器材進行原污染項目的試劑空白檢測,連續(xù)3次均陰性后方可進行常規(guī)檢測。

為了自己要高度重視這些「PCR實驗室」內(nèi)的職業(yè)危害
充滿負壓、噪音、病毒的PCR實驗室到底有沒有職業(yè)危害這個問題,小編還是決定要拋開專業(yè)說專業(yè)。

負壓實驗室,是檢測病毒樣本的最基本條件。所謂負壓,就是在實驗室內(nèi)氣壓比實驗室外環(huán)境的正常氣壓要低,在實驗室內(nèi)外產(chǎn)生一定的壓力差,從而控制氣體流動的方向,保證氣流從實驗室外流向?qū)嶒炇覂?nèi),負壓能確保室內(nèi)空氣不會泄漏出去造成污染,可以有效的保護環(huán)境。

但是負壓實驗室環(huán)境會不會對人體會造成傷害呢?搜遍現(xiàn)有的文獻資料,所有論點都是強調(diào)對環(huán)境的安全性,對于在負壓環(huán)境下的人有沒有影響這個問題,并沒有一篇文章提及,更別說進行科學(xué)詳細的論述。

但沒提及的事情不等于不存在,或許這是從業(yè)人員面臨的一種新型的職業(yè)危害,有些危害可能已經(jīng)出現(xiàn)了,可有些危害一時還不易被工作人員察覺,但實際從事該工作的工作者應(yīng)當(dāng)給予重視。

來源:“藥物微生物檢驗”公眾號
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