Jackson公司蛋白質(zhì)印跡指南丨膜清洗前言：

洗滌去除印跡上存在的未結(jié)合或聚集的蛋白質(zhì)以及可能干擾靶分子檢測(cè)并有助于降低背景信號(hào)的未結(jié)合試劑?？梢酝ㄟ^(guò)提高信噪比來(lái)提高檢測(cè)靈敏度，從而更準(zhǔn)確地分析目標(biāo)蛋白質(zhì)。我們的蛋白質(zhì)印跡指南的第?7?部分詳細(xì)介紹了蛋白質(zhì)印跡的洗滌步驟的實(shí)踐。

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Jackson公司蛋白質(zhì)印跡指南丨膜清洗概述：

·洗滌步驟程序

·選擇合適的洗滌緩沖液

·參考

一、洗滌步驟程序?

1.洗滌通常在室溫下進(jìn)行。

2.通過(guò)將膜置于完全浸沒(méi)膜的一定體積的洗滌緩沖液中來(lái)洗滌印跡。例如，平均?10 cm2 的印跡需要?>40 ml?的洗滌緩沖液，我們通常使用?100 ml。

3.將膜在洗滌緩沖液中孵育?5-10?分鐘，并使用搖桿或平臺(tái)搖床或合適的印跡處理器不斷攪拌。

4.然后在每次試劑孵育之間重復(fù)洗滌過(guò)程。

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二、選擇合適的洗滌緩沖液

1.磷酸鹽緩沖液?(PBS)

PBS?溶液的配方可能有所不同，但通過(guò)結(jié)合磷酸鈉和氯化鈉將溶液緩沖至?7.5?的?pH?值，可以接近生理?xiàng)l件。如果目標(biāo)蛋白被磷酸化，或者要使用堿性磷酸酶?(AP)?偶聯(lián)物，則應(yīng)避免使用?PBS，因?yàn)榱姿猁}會(huì)與磷酸化蛋白相互作用或淬滅?AP?活性，從而影響結(jié)果的可靠性。

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2.Tris?緩沖鹽水?(TBS)

TBS?有時(shí)用作洗滌緩沖液以替代?PBS。它通常通過(guò)將?Tris Base?與?Tris HCL?和氯化鈉混合制成生理?pH?值約為?7.2?的溶液。

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3.洗滌劑

加入去污劑如?Triton X-100、SDS?或?Tween-20? 以防止未結(jié)合的蛋白質(zhì)聚集。粘性復(fù)合物可以形成并與膜結(jié)合，造成背景?Tween-20? 通常以溶液的?0.05%?至?0.1% v/v?使用。

高于?0.1%?的濃度會(huì)從膜上剝離靶蛋白以及與其結(jié)合的抗體，從而降低印跡的信號(hào)和準(zhǔn)確性。

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注意1：微生物生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生背景信號(hào)

洗滌緩沖液應(yīng)在使用前新鮮配制。

注意2：洗滌緩沖液中的封閉試劑

有時(shí)將封閉試劑添加到洗滌緩沖液中。我們建議僅使用緩沖溶液，不添加封閉蛋白，如奶粉或?BSA。

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三、Jackson ImmunoResearch?蛋白質(zhì)印跡指南丨膜清洗部分文獻(xiàn)參考：

Blancher C. et al. (2001). SDS-PAGE and Western Blotting Techniques. Methods in Molecular Medicine. DOI: 10.1385/1-59259-136-1:145.

Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc. (2017). Western Blotting Troubleshooting Guide! https://www.jacksonimmuno.com/secondary-antibody-resource/technical-tips/western-blot-trouble-shooting/

GE Healthcare. (2011). Western Blotting Principles and Methods.

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Jackson公司專注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)領(lǐng)域覆蓋各大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動(dòng)物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson公司的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。