技術(shù)背景：

單鏈抗體（single-chian variable fragment，scFv），是由抗體重鏈的可變區(qū)與輕鏈的可變區(qū)在一段肽鏈連接下構(gòu)成的小分子，是具有抗體活性的最小結(jié)構(gòu)功能結(jié)構(gòu)單位；單鏈抗體可以由表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)，也可以用噬菌體展示技術(shù)進(jìn)行制備，由于其分子量小，穿透力強(qiáng)，半衰期短，免于抗原性低等等特點(diǎn)，所以在臨床診斷，治療，預(yù)防方面有重要作用和廣闊的應(yīng)用前景，本文就單鏈抗體結(jié)構(gòu)，制備，應(yīng)用等方面做一個(gè)概述。

scFv結(jié)構(gòu)，完整的抗體由兩條重鏈和兩條輕鏈構(gòu)成，透過(guò)人工改造，可使其直接表達(dá)可變區(qū)，通過(guò)人工合成的鏈接肽基因?qū)⒖贵w重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)連接成重組基因，由該重組基因表達(dá)的抗體就稱(chēng)之為單戀抗體，結(jié)構(gòu)上，可將重鏈的N端與輕鏈的C端相連，也可以將輕鏈的N端與重鏈的C端相連，鏈接肽長(zhǎng)度通常為15-25個(gè)氨基酸，通常由甘氨酸和絲氨酸構(gòu)成，具有一定的彈性以及蛋白酶抗性，作用是鏈接重鏈輕鏈，并且保持一定的彈性，使重鏈輕鏈結(jié)合后仍然可以配對(duì)，構(gòu)成單價(jià)抗原結(jié)合位點(diǎn)。

Fab片段（Fragment of antigen binding）也叫做抗原結(jié)合片段，是抗體結(jié)構(gòu)筑龍可以與抗原結(jié)合的區(qū)域，由一條完整的輕鏈與重鏈的VH與CH1結(jié)構(gòu)域組成，分子量約為5X104 ? 輕鏈與重鏈均存在一個(gè)恒定區(qū)與可變區(qū)，輕重鏈之間存在二硫鍵鏈接。目前Fab抗體可以在實(shí)驗(yàn)室中制備出來(lái)。

技術(shù)簡(jiǎn)介：

單鏈抗體的制備：

scFv可在多個(gè)表達(dá)系統(tǒng)中進(jìn)行表達(dá)，目前比較常用的，是大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)和哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)。

另外可以使用噬菌體展示技術(shù)生產(chǎn)得到scFv片段，通過(guò)免疫動(dòng)物得到雜交瘤細(xì)胞，從中提取cDNA，利用逆轉(zhuǎn)錄PCR得到全套抗體的重鏈可變區(qū)VH和輕鏈可變區(qū)VL，利用重疊PCR將VH和VL片段擴(kuò)增得到可變區(qū)基因片段，然后將基因克隆到噬菌體載體中了，電轉(zhuǎn)感受態(tài)大腸桿菌，輔助噬菌體超染，得到的上清液即為單鏈抗體庫(kù)，以抗原為固相，經(jīng)過(guò)3-5輪吸附-洗脫-擴(kuò)增篩選，即可得到單鏈抗體。

Fab片段的制備：

目前有酶解法、利用表達(dá)系統(tǒng)制備以及利用噬菌體展示技術(shù)進(jìn)行抗體庫(kù)篩選等方法進(jìn)行Fab片段的制備。

酶解法：通常用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶等對(duì)免疫球蛋白G進(jìn)行降解，得到Fab，F(xiàn)c片段等產(chǎn)物；

利用表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)Fab片段：通常利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)與哺乳動(dòng)物動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)；大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)具有生產(chǎn)成本低，生產(chǎn)速度快等優(yōu)點(diǎn)，但是容易形成包涵體，復(fù)性后活性難以保證活性；用哺乳動(dòng)物表達(dá)，可以順利形成二硫鍵；更接近天然Fab結(jié)構(gòu)，活性也更好；

噬菌體展示技術(shù)：制備Fab片段抗體庫(kù)，可經(jīng)過(guò)熟輪的篩選富集，即可得到高親和性的抗體。

根據(jù)您的需求定制如下各種服務(wù)：

服務(wù)內(nèi)容

交付內(nèi)容

實(shí)驗(yàn)周期

產(chǎn)品價(jià)格

抗體片段or

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)

基因合成；亞克隆；

表達(dá)抗體構(gòu)建；

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染；

產(chǎn)物純化；

抗體質(zhì)檢；

交付高純度大量抗體

實(shí)驗(yàn)流程報(bào)告

抗體質(zhì)檢報(bào)告

4-6周

詢(xún)價(jià)

抗體片段or

穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建

穩(wěn)定細(xì)胞株篩選

親和力排序

實(shí)驗(yàn)流程報(bào)告；

質(zhì)檢報(bào)告；

穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株；

周期不等，請(qǐng)您咨詢(xún)

為您提供如下抗體構(gòu)建服務(wù)（包括但不限于下列服務(wù)）：

抗體類(lèi)型

組分

化合價(jià)

分子量(kDa)

半衰期/h

機(jī)體清除路線(xiàn)

Fab

VH+CH1+VL+Cl

（輕重鏈二硫鍵鏈接）

單體

50-55

12-20

腎臟

scFv

VH+VL

單體

30

2-4

腎臟

sdAb

VHH

單體

15

0.5

腎臟

di-scFv

scFv

二聚體

60

4-8

腎臟

Fc融合蛋白

(pr.+CH2+CH3)×2

二聚體

/

/

肝臟

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