PicaGreen dsDNA定量試劑盒*2000次*試劑盒可用于在存在RNA、蛋白質(zhì)和常見(jiàn)污染物的情況下定量測(cè)量樣品中的雙鏈DNA。PicaGreen允許對(duì)低至低ng/mL的dsDNA進(jìn)行定量。 試劑盒包含PicaGreen染料、緩沖液和用于測(cè)量的DNA標(biāo)準(zhǔn)品。它與熒光計(jì)、熒光板讀數(shù)器、比色杯和微體積熒光計(jì)兼容。

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艾美捷?Biogradetech?PicaGreen dsDNA定量試劑盒：

中文名稱：PicaGreen dsDNA定量試劑盒*2000次*

英文名字：PicaGreen dsDNA Quantification Kit *2000T*

Biogradetech貨號(hào)：B-CHK001-1mL

規(guī)格：1mL

保存建議：PicaGreen dsDNA定量試劑盒*2000次*儲(chǔ)存條件：4°C&室溫避光。 穩(wěn)定性：在適宜條件下可以儲(chǔ)存6個(gè)月。

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在分子生物學(xué)的試驗(yàn)過(guò)程中,PicoGreen dsDNA?定量試劑盒是熒光檢測(cè)雙鏈?DNA?并進(jìn)行定量的一種產(chǎn)品,這種方法非常靈敏。常用于分子生物學(xué)技術(shù)中的:cDNA?文庫(kù)的構(gòu)建;用于亞克隆的?DNA?片段純化及應(yīng)用,比如進(jìn)行?DNA?定量、產(chǎn)物擴(kuò)增和引物的進(jìn)一步檢測(cè)。?PicoGreen?定量檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、方便,被多家生物制品廠所選擇,成為生物制品殘留DNA?檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)。

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操作步驟:

1、試劑制備

PicaGreen dsDNA (Component A )(定量試劑是以?1mL?的濃縮液形式保存在無(wú)水的?DMSO(二甲基亞砜)中。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天,配制?2XPicoGreen?試劑的操作溶液,用?1xTE(Component

B)按?1:200?的比例稀釋濃縮液。如果要準(zhǔn)備足夠的操作溶液測(cè)定?20?個(gè)樣品,可在?20mL1x TE(Component B)中加入?100μLPicaGreen dsDNA(Component A )?定量試劑。由于試劑容易吸附到玻璃表面,要在塑料容器中配制。PicaGreen?試劑(Component A )見(jiàn)光易降解,所以應(yīng)將配好的溶液用錫箔包住或放置暗處避光保存。溶液 在配制好數(shù)小時(shí)內(nèi)使用,以保證 結(jié)果。

2、DNA?標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1?預(yù)備?1μg/mLdsDNA(Component c)或貯存液于?1x TE?中。根據(jù)在?1cm?光程長(zhǎng)度的比色杯中?A260nm?時(shí)的吸光度確定?DNA?濃度;相應(yīng)于 μg/mLdsDNA?溶液?A260=0.02。盡管任何純化的?dsDNA?制劑都可用來(lái)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,但常用的是小牛胸腺?DNA。 用跟被檢測(cè)的樣品相似的?DNA?做標(biāo)準(zhǔn)曲線,用或長(zhǎng)或短的線型?DNA?片段測(cè)定相近大小的酶切片段;質(zhì)粒用于測(cè)定質(zhì)粒?DNA。然而大部分線狀?dsDNA?分子,不管其片段長(zhǎng)度大小,都會(huì)產(chǎn)生大致相等的信號(hào)。PicaGreen?試劑測(cè)定法在通常污染核酸制劑的幾種復(fù)合物存在的條件下仍能保持線狀,盡管信號(hào)強(qiáng)度可能受到影響。因此,為了得到有效的對(duì)照處理,被用來(lái)做標(biāo)準(zhǔn)曲線的?dsDNA?溶液要用和實(shí)驗(yàn)樣品相同的方式來(lái)處理,并且應(yīng)該包含相同的可能存在的污染物。

2.2?要產(chǎn)生從?0.5ng/mL?到?500ng/mL(見(jiàn)表?1)單重復(fù)?8?個(gè)點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,在?2X?終濃度下配制一系列的?DNA?溶液,混合相同體積的?2XDNA?和?2XPicaGreen?操作溶液,放入10×10mm?比色杯中?；旌舷嗤w積的?1XTE?和?2XPicaGreen?操作溶液以備空白對(duì)照。避光于室溫下放置?2-5?分鐘。

表1：用?10×10mm?比色杯時(shí)?DNA?標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3?孵育后用合適的熒光計(jì)測(cè)量樣品熒光值。選擇藍(lán)色激發(fā)光,用熒光值 的樣品校正儀器。

2.4?測(cè)量剩余樣品的熒光值。不同的微型熒光計(jì)將給出一個(gè)直接的濃度讀數(shù),數(shù)據(jù)可以用來(lái)產(chǎn)生?DNA?濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線,下面以?TBS-380?微型熒光計(jì)為例。

3、樣品分析

3.1?用?1X TE?稀釋未知?DNA?樣品至需要的體積(10×10mm?比色杯需?1.0mL,微量檢測(cè)皿需?25-100μL)。對(duì)樣品高度稀釋可以確保任何污染物都被 限度地沖淡。然而也要避免取樣體積太小而無(wú)法 吸取的情況。去除樣品中?RNA?和?ssDNA?參照?4?部分。

3.2?在每個(gè)樣品中加入?2XPicaGreen?試劑的操作溶液(3.1?節(jié)準(zhǔn)備),混合好,將混合物移入合適的比色杯,避光于室溫下放置?2-5?分鐘。3.3?可以對(duì)樣品進(jìn)行不同的稀釋處理重復(fù)測(cè)定以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4、去除樣品中單鏈核苷酸

當(dāng)?ssDNA?與?dsDNA?等摩爾濃度時(shí),后者的測(cè)定受前者的干擾很小。前者濃度?10?倍于后者時(shí),對(duì)熒光信號(hào)的干擾也不過(guò)?10%。但當(dāng)?DNA?濃度低時(shí),ssDNA?能產(chǎn)生較大干擾在高濃度時(shí),由?RNA?結(jié)合?PicaGreen?試劑產(chǎn)生的熒光值用?RNA?酶處理樣品可消除。RNA?酶?A、酶?T1?結(jié)合核酸酶?S1?能除去所有單鏈核酸,從而保證樣品熒光值是由?dsDNA?產(chǎn)生。(具體做法請(qǐng)查閱相關(guān)的參考文獻(xiàn))