基本信息

細(xì)胞名稱：小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞

組織來(lái)源：小鼠

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

支原體：無(wú)

背景簡(jiǎn)介：

神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞分離自腦組織；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面，即外側(cè)面(約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3)、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積)；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。小膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的一種，相當(dāng)于腦和脊髓中的巨噬細(xì)胞，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的第一道也是最主要的一道免疫防線。小膠質(zhì)細(xì)胞大約占大腦中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的20%，小膠質(zhì)細(xì)胞不停地清除著中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的損壞的神經(jīng)，斑塊及感染性物質(zhì)。無(wú)數(shù)臨床上和神經(jīng)病理學(xué)研究表明激活的小膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)退化類(lèi)疾病的發(fā)病機(jī)理中起到十分重要的作用，如帕金森病、多發(fā)性硬化和阿茲海默癥等。但是過(guò)多激活或失控的小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)引起神經(jīng)毒性。它們是促炎因子和氧化應(yīng)激的重要來(lái)源，如腫瘤壞死因子(TNF)，一氧化氮，白介素等有神經(jīng)毒性的物質(zhì)。

細(xì)胞形態(tài)

細(xì)胞特點(diǎn)

①神經(jīng)膠質(zhì)出現(xiàn)在大腦發(fā)育早期向成熟階段轉(zhuǎn)化的過(guò)程中；當(dāng)程序性細(xì)胞死亡時(shí)，或在大腦發(fā)育的過(guò)程中，中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損或受到病理?yè)p壞時(shí)，神經(jīng)膠質(zhì)可做為大腦的巨噬細(xì)胞；

②膠質(zhì)細(xì)胞能在Ⅱ類(lèi)組織相容性復(fù)合體表達(dá)CD-4陽(yáng)性T細(xì)胞時(shí)表達(dá)抗原，能進(jìn)行Fc介導(dǎo)的巨噬作用，并且與造血細(xì)胞和巨噬細(xì)胞組織共享抗原。

材料準(zhǔn)備

1.分離試劑及工具：

小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞完全培養(yǎng)基 Microglia Basal Medium (MBM)（IMP-M120-1）、

HBSS緩沖液、PBS磷酸緩沖液、10% FBS DMEM培養(yǎng)基、75%酒精、多聚賴氨酸、尖頭鑷、彎鑷、剪刀、冰盤(pán)、10 厘米培養(yǎng)皿、6?厘米 培養(yǎng)皿。

2. 提前開(kāi)啟紫外線照射超凈臺(tái)30分鐘。將培養(yǎng)基和添加劑室溫融化，使用前室溫中預(yù)溫10-30?分鐘。HBSS緩沖液緩沖液預(yù)冷，紫外照射完畢后，75%酒精消毒超凈臺(tái)，超凈臺(tái)通風(fēng)10?分鐘以上。

包被培養(yǎng)皿：將10x的多聚賴氨酸稀釋成1x的工作液，將培養(yǎng)瓶底部加滿。過(guò)夜或兩小時(shí)，結(jié)束后，使用PBS緩沖液洗2-3次備用。

操作步驟

01.?取3個(gè)10 厘米 培養(yǎng)皿，3個(gè)6 厘米 培養(yǎng)皿倒入HBSS緩沖液,置于冰盤(pán)上。

02.?取出生2天內(nèi)的新生鼠，泡入裝有75%酒精的離心管內(nèi)。

03.?待小鼠死亡后，在1中漂洗2-3次。

04.?取腦子：用尖頭鑷剝離鼠頭部及腦殼，取出腦子，放入6 厘米培養(yǎng)皿。

05.?剝腦膜：將一個(gè)腦移至一個(gè)新的6 厘米 培養(yǎng)皿（兩三個(gè)腦子用一個(gè)6 厘米培養(yǎng)皿，防止太久HBSS緩沖液升溫），在解剖鏡下去除嗅球，小腦及兩個(gè)大腦半球中間的連接物，將剝干凈的皮層放入新的6 厘米培養(yǎng)皿。

06.?將剝離好的皮層夾碎至漿糊狀，組織使用10%FBS DMEM培養(yǎng)基稀釋?zhuān)瑴?zhǔn)備鋪入包被的培養(yǎng)瓶。T75培養(yǎng)瓶3個(gè)腦袋，大培養(yǎng)瓶 4-5個(gè)腦袋。

07.?培養(yǎng)三天后，更換神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞完全培養(yǎng)基，換液后一周左右長(zhǎng)滿，期間不用再換液。

細(xì)胞鑒定

01.?形態(tài)觀察

小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈梭形、多角形，細(xì)胞屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

02.?標(biāo)志物鑒定

逸漠實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)CD11b免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上

小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物熒光鑒定

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