AAV是將靶基因運送至體內(nèi)的重要載體之一，合適的給藥方法能夠?qū)崿F(xiàn)靶基因在特定組織器官的高表達(dá)。本文將詳細(xì)介紹AAV在心血管系統(tǒng)的給藥方式，另外小編還找到了教學(xué)視頻，小伙伴可以將視頻網(wǎng)址復(fù)制到瀏覽器中觀看學(xué)習(xí)哦~

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心肌原位注射操作步驟[1-2]

1、小鼠麻醉固定在手術(shù)臺上，剪除頸部和胸部被毛，使用酒精消毒手術(shù)區(qū)域。

2、光纖燈照射到頸部進(jìn)行食管照明，插入氣管，將管道連接到呼吸機(jī)上（95% O2/5% CO2），以恒定正壓通氣（TOPO呼吸機(jī)：呼吸頻率125次/分；吸氣壓力峰值10-12 cmH2O），需要根據(jù)呼吸機(jī)使用指南和小鼠狀態(tài)調(diào)節(jié)。

3、用鑷子將皮膚向上拉離胸部，用無菌手術(shù)刀刀片在與胸骨平行的皮膚上做一個1.5cm的切口。

4、使用微型剪刀在肋間肌上開一個小洞，剪斷第三個肋骨，顯露胸膜。

5、用鉗將心包從心臟上拉開，用齒形鉗輕輕撕開，顯露心臟。必要時可于左外側(cè)墊紗布隔開左肺。

6、在心肌表面注射病毒，可以以心臟長軸距離心尖0.5 mm處為中心，在其上下左右2 mm處分四點于心肌內(nèi)注射病毒，注射成功后可見局部顏色由紅色轉(zhuǎn)為白色，也可以根據(jù)想要標(biāo)記的肌肉大小進(jìn)行調(diào)整，一般都選擇多點注射病毒，病毒擴(kuò)散效果比較好。病毒注射以后，探查無出血后關(guān)胸，注意勿縫到心肺及血管。在縫合過程中胸腔留置吸引管一根，其他部分的肌肉皮膚進(jìn)行逐層縫合。

7、在縫合完畢以后，針筒抽吸胸腔積氣積液。

8、小鼠蘇醒后，待其狀態(tài)良好，拔除氣管插管，停止人工呼吸，清除氣道血塊及分泌物，進(jìn)行一針縫合氣管及肌肉切口。

9、在小鼠背部皮下間隙注射0.5ml溫?zé)o菌生理鹽水，將小鼠置于籠內(nèi)暖墊上，直至小鼠恢復(fù)活動能力。

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視頻教程：

https://www.jove.com/cn/t/2581/coronary-artery-ligation-intramyocardial-injection-murine-model

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尾靜脈注射操作步驟[3]

1、固定小鼠，僅使小鼠的身體固定，無需麻醉?？梢允褂脤Ｓ玫男∈蠊潭ㄆ?，也可以用離心管甚至燒杯代替。

2、注射前首先要讓小鼠的血管充盈。可以采用75%的酒精棉球擦拭的方法或者采用溫水浸泡的方法。若小鼠的血管不清楚，推薦采用溫水浸泡的方法，水溫以不燙手為宜。溫水浸泡2～3分鐘后，取出小鼠尾巴，用干棉球擦拭。

3、小鼠尾部共有四條血管，一般認(rèn)為左右的兩條靜脈比較容易注射，多采用這兩條靜脈進(jìn)針。一般要求進(jìn)針部位靠近小鼠的尾端，這樣若注射失敗的話，還可以再向上選擇進(jìn)針點。但是進(jìn)針部位也不可以太靠下，因為越往下，靜脈越細(xì)，操作越難，一般以小鼠尾巴下三分之一的位置比較好。

4、注射一般使用一次性的1ml的注射器，針頭用4號。

5、進(jìn)針時操作者左手食指和拇指固定住小鼠的尾巴，讓小鼠的尾巴在經(jīng)過拇指后向下彎曲，進(jìn)針點靠近拇指指甲。針頭和血管呈約30°角，針尖斜面朝上，輕輕挑刺入皮膚后針頭立即和血管平行，確定針頭在血管內(nèi)后推注藥液，正常情況下，推注的過程應(yīng)該沒有明顯阻力，血管也不會鼓起。推液時動作宜輕柔，若發(fā)現(xiàn)血管鼓起，那是針頭沒有刺入血管，需立即拔出針頭。注射完病毒后，用無酒精棉花止血（千萬不能用酒精棉，酒精會加速出血）。

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視頻教程：

https://www.jove.com/cn/v/61961/a-contemporary-warmingrestraining-device-for-efficient-tail-vein

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以上就是兩種常用的AAV心臟給藥方式。心肌原位注射特異性強(qiáng)但對動物損傷較大，尾靜脈注射特異性不如心肌原位注射，但搭配cTNT等特異性啟動子同樣可以實現(xiàn)目的基因在心肌細(xì)胞特異性表達(dá)。另外漢恒生物還可以提供心肌成纖維細(xì)胞特異性啟動子POSTN、COL2A1等。如果對AAV心血管系統(tǒng)給藥方式有疑問，歡迎咨詢漢恒生物！

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參考文獻(xiàn)：

[1]?Virag, Jitka A I., Lust, Robert M.. Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction. Journal of visualized experiments : JoVE, 2011, (52).

[2]?楊琳珊, 占貞貞, 汪波, et al. 小鼠尾靜脈注射與心肌注射腺病毒載體轉(zhuǎn)染效率的比較[J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志, 2016, 26(8):5.

[3]?Yano, Junko., Lilly, Elizabeth A., Noverr, Mairi C., Fidel, Paul L..?A Contemporary Warming/Restraining Device for Efficient Tail Vein Injections in a Murine Fungal Sepsis Model. Journal of visualized experiments : JoVE, 2020, (165).