組培實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備-上海農(nóng)卉組培
目前絕大部分細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室使用超凈工作臺(tái)實(shí)現(xiàn)無(wú)菌操作,具有操作簡(jiǎn)單、安裝方便、占用空間小且凈化效果很好。安徽人和凈化為您介紹兩種主要超凈工作臺(tái)-側(cè)流式(垂直式)和外流式(水平層流式)。工作原理一般是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾,由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱,再經(jīng)空氣過濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風(fēng)速通過無(wú)菌區(qū),從而形成無(wú)塵無(wú)菌的高潔凈度工作環(huán)境。

1)保證無(wú)菌操作:植物組織培養(yǎng)是在嚴(yán)格無(wú)菌的條件下進(jìn)行的。要做到無(wú)菌的條件,需要一定的環(huán)境、設(shè)備、器材和用具。
2)工作方便:按組織培養(yǎng)程序來(lái)沒計(jì),避免某些環(huán)節(jié)倒排,引起日后工作混亂。
3)培養(yǎng)條件:人工控制溫度、光照、濕度等。
標(biāo)準(zhǔn)組織培養(yǎng)室包括藥品區(qū)、洗滌區(qū)、制備區(qū)、滅菌區(qū)、儲(chǔ)放區(qū)、無(wú)菌操作區(qū)和培養(yǎng)區(qū)等,可以根據(jù)自己的實(shí)際條件進(jìn)行合并組建。

主要任務(wù):藥品的貯備、稱量、溶解、配制、培養(yǎng)基分裝。器具的洗滌、干燥、保存、培養(yǎng)基的滅菌等。
主要設(shè)備:藥品柜、防塵櫥(放置培養(yǎng)容器)、冰箱、電子天平、蒸餾水器、酸度計(jì)、高壓滅菌鍋、干燥滅菌器(如烘箱)、常用的培養(yǎng)基配制用玻璃儀器、操作臺(tái)等。
主要任務(wù):主要用于植物材料的消毒、接種、培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移、試管苗的繼代、原生質(zhì)體的制備以及一切需要進(jìn)行無(wú)菌操作的技術(shù)程序。
主要設(shè)備:紫外光源、超凈工作臺(tái)、消毒器、酒精燈、接種器械(接種鑷子、剪刀、解剖刀、接種針)等。

接種室宜小不宜大,一般7~8平米,要求地面、天花板及四壁盡可能密閉光滑,易于清潔和消毒。配置拉動(dòng)門,以減少開關(guān)門時(shí)的空氣擾動(dòng)。
接種室要求干爽安靜,清潔明亮。在適當(dāng)位置吊裝1~2盞紫外線滅菌燈,用以照射滅菌。安裝一小型空調(diào),使室溫可控,這樣可使門窗緊閉,減少與外界空氣對(duì)流。接種室應(yīng)設(shè)有緩沖間,面積1m2為宜。進(jìn)入無(wú)菌操作室前在此更衣?lián)Q鞋,以減少進(jìn)出時(shí)帶入接種室雜菌。緩沖間也安一盞紫外線滅菌燈,用以照射滅菌。
培養(yǎng)室是將接種的材料進(jìn)行培養(yǎng)生長(zhǎng)的場(chǎng)所。根據(jù)需要培養(yǎng)架的大小、數(shù)目、及其他附屬設(shè)備來(lái)定面積。其設(shè)計(jì)以充分利用空間和節(jié)省能源為原則。高度比培養(yǎng)架略高為宜,周圍墻壁要求有絕熱防火的性能。
培養(yǎng)室要的因素是溫度,一般保持在20—27℃左右,具備產(chǎn)熱裝置,并安裝窗式或立式空調(diào)機(jī)。
培養(yǎng)架一般設(shè)5層,低一層離地高約lOcm,其他每層間隔30cm左右,培養(yǎng)架高1.7m左右。其長(zhǎng)度根據(jù)日光燈長(zhǎng)度而設(shè)計(jì),如采用40W日光燈,則長(zhǎng)I.3m,30W的長(zhǎng)lm,寬度一般為60cm。

由于熱帶植物和寒帶植物等不同種類要求不同溫度,不同種類有不同的培養(yǎng)室。室內(nèi)濕度也要求恒定,相對(duì)濕度以保持在70%~80%為好,可安裝加濕器??刂乒庹諘r(shí)間可安裝定時(shí)開關(guān)鐘,一般需要每天光照10-16h,也有的需要連續(xù)照明。
現(xiàn)代組培實(shí)驗(yàn)室大多設(shè)計(jì)為采用天然太陽(yáng)光照作為主要能源,這樣不但可以節(jié)省能源,而且組培苗接受太陽(yáng)光生長(zhǎng)良好,馴化易成活。在陰雨天可用燈光作補(bǔ)充。
倒置式顯微鏡是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室日常工作常規(guī)設(shè)備,主要用于日常了解細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并觀察有沒有污染發(fā)生。如資金允許,建議選用配置有照相系統(tǒng)的高品質(zhì)相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統(tǒng)或縮時(shí)電影拍攝裝置等,可隨時(shí)拍攝并記錄細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
體外培養(yǎng)的細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞一樣,需要在恒定的溫度下生存,一般適生長(zhǎng)溫度為37℃,溫差變化不應(yīng)超過±0.5℃。溫度升高2℃時(shí),變不利于細(xì)胞生存,溫度達(dá)到40℃以上細(xì)胞將很快死亡。因此,可控溫的恒溫培養(yǎng)箱、CO2培養(yǎng)箱是好的選擇。
應(yīng)選隔水式或晶體管式自控溫培養(yǎng)箱,此類培養(yǎng)箱靈敏度高,溫度控制較穩(wěn)定。一般的恒溫培養(yǎng)箱價(jià)格較便宜,其缺點(diǎn)是只宜于作密閉式培養(yǎng)。
目前多數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)室已廣泛使用。CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點(diǎn)是能夠提供進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所需要的一定量的CO2(常用濃度為百分之5),易于穩(wěn)定培養(yǎng)液pH,適用于開放或半開放培養(yǎng)。使用培養(yǎng)瓶時(shí),為使培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)與外界保持通氣狀態(tài),可將瓶蓋略微旋松,為避免細(xì)胞被污染,使用這種培養(yǎng)方式時(shí),培養(yǎng)箱內(nèi)空氣須保持清潔,需定期用紫外線照射或酒精消毒,同時(shí)培養(yǎng)箱內(nèi)應(yīng)放置盛有無(wú)菌蒸餾水的水槽,防止培養(yǎng)液蒸發(fā),保持箱內(nèi)相對(duì)濕度在百分之100。
儲(chǔ)存器常用的液氮容器,根據(jù)使用需要分為不同類型和規(guī)格。選擇液氮容器時(shí)需要考慮三個(gè)因素:容積大小、取放使用方便、液氮揮發(fā)量。液氮容器的大小一般在25-500L,可以儲(chǔ)存1ml的凍存管250-15000個(gè)左右。液氮溫度低溫可達(dá)-196℃,使用時(shí)應(yīng)注意避免凍傷。由于液氮易揮發(fā),需注意觀察剩余液氮量,及時(shí)補(bǔ)充,避免液氮不足使細(xì)胞受損或死亡。目前有許多智能型細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器可供選擇,可配置有電子控制器的液氮儲(chǔ)存器,實(shí)現(xiàn)凍存自動(dòng)化;并可監(jiān)測(cè)液氮水平和樣品溫度,確保樣品溫度始終處于設(shè)定溫度點(diǎn);可配置報(bào)警系統(tǒng),設(shè)置液氮液面、溫度、電池、電壓、電源等失常情況下報(bào)警;同時(shí)具備熱氣體旁路系統(tǒng),防止高于-130℃的暖空氣進(jìn)入液氮罐,從而更有效地保護(hù)樣品,防止容器內(nèi)升溫。另外,可選擇液氮供應(yīng)罐通過連接管給儲(chǔ)存罐補(bǔ)充液氮,保證樣品安全。
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),通常使用離心機(jī)制備細(xì)胞懸液、調(diào)整細(xì)胞密度、洗滌和收集細(xì)胞。一般常規(guī)配置4000rpm臺(tái)式離心機(jī);若要做細(xì)胞沉降,需要使用80-100G離心力,因?yàn)殡x心力過大會(huì)損傷細(xì)胞。根據(jù)不同要求,有大容量、可調(diào)溫度離心機(jī)、高速離心機(jī)和低溫冷凍離心機(jī)等更多功能離心機(jī)可選擇。
常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精確度一般為0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根據(jù)取樣量量和精度要求選擇合適的天平:取樣量大于100mg宜選用準(zhǔn)確度0.1mg的天平;取樣量100-10mg,選用準(zhǔn)確度0.01mg的天平;取樣量10mg宜選用準(zhǔn)確度0.001mg的天平。天平需要定期校準(zhǔn),可選擇有自動(dòng)校準(zhǔn)功能的天平,方便維護(hù)。天平使用需要注意清潔,避免腐蝕性粉末、液體直接接觸稱量臺(tái)。