Southern印跡（簡介、應(yīng)用、步驟）
什么是Southern印跡
Southern印跡是一種雜交技術(shù)，用于鑒定樣品中的特定DNA。該技術(shù)最初由Edward M. Southern于1975年開發(fā)。該過程可識別樣品中特定 DNA 序列的 DNA 序列、大小和豐度。Southern印跡膜如圖1所示。
圖1：Southern印跡膜
Southern印跡的應(yīng)用
Southern印跡的應(yīng)用如下所述。
檢測特定 DNA 片段
分離特定的 DNA 片段
識別突變和基因重排
在 RFLP 測定中（限制性片段長度多態(tài)性）
識別遺傳性疾病
識別傳染性病原體
親子鑒定
在DNA指紋識別中識別罪犯
Southern印跡步驟
Southern印跡涉及通過凝膠電泳根據(jù)大小分離DNA片段，將它們轉(zhuǎn)移到膜中，用標(biāo)記的序列特異性探針雜交它們，并檢測標(biāo)記的條帶。Southern印跡的步驟如下所述。
DNA消化 – DNA樣品被限制性內(nèi)切酶消化以獲得DNA片段，這些片段通過PCR擴(kuò)增。
凝膠電泳 – DNA片段通過凝膠電泳進(jìn)行尺寸分餾。
變性 – 將具有分餾DNA的凝膠浸泡在NaOH或HCl中以使雙鏈DNA變性。
印跡 – 凝膠中的DNA片段通過稱為印跡的過程轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜中。
烘烤和封閉 – 烘烤帶有DNA片段的印跡紙以將DNA固定在膜上。然后，用牛血清白蛋白（BSA）或酪蛋白處理未占用的結(jié)合位點(diǎn)使其飽和。
與標(biāo)記探針雜交 – DNA結(jié)合膜用標(biāo)記探針處理，該探針包含與感興趣的DNA片段的互補(bǔ)核苷酸序列。雜交探針的長度通常為100-500 bp，并用放射性核苷酸標(biāo)記。
通過放射自顯影進(jìn)行可視化 – 在放射自顯像下對探針結(jié)合膜進(jìn)行可視化，以獲得感興趣的DNA片段的模式。
圖2：Southern印跡
結(jié)論
Southern印跡是一種雜交技術(shù)，用于從樣品中鑒定特定的DNA序列。在此過程中，DNA樣品被限制性內(nèi)切酶分餾，混合物在凝膠上電泳。然后，將凝膠中的條帶圖案轉(zhuǎn)移到尼龍膜中并與標(biāo)記的探針雜交，從而可以檢測感興趣的片段。
