艾美捷CompTech人補體C5蛋白：

名稱：?C5蛋白

編號：?A120

規(guī)格：?250 μg/vial

濃度：?1.0 mg/mL (實際濃度見分析證書)

類型?冷凍液體

活動：?>值為80%，與正常人血清標準相比。

純度：?>95%由SDS-PAGE

緩沖區(qū)：?10 mM磷酸鈉，145 mM氯化鈉，pH 7.2

消缺系數。?A280 nm在1.0 mg/mL時的=為1.03

分子量：?190000Da (2鏈)

防腐劑：?無，0.22μm過濾

存儲：?- 7 0oC或以下。避免凍融。

根源?正常的人類血清?(經認證的HBsAg、HTLV-I/II、STS和HCV、 HIV1和HIV-II抗體檢測均為陰性) 。

預防措施?在處理人類血液制品時要采取常規(guī)的預防措施。

一般說明

天然人類C5是一種天然糖基化 (1.6%) 多肽，包含兩個二硫鍵鏈。C5對于膜攻?擊復合物?(MAC) 的形成是必不可少的，并可被補體激活的所有三種途徑激活。補體?激活的每個途徑都產生蛋白水解酶復合物?(C3/C5轉化酶) ，它們與目標表面結合???(Ross，G。D. (1986)).這些酶在C5的較大的阿爾法鏈中切割一個肽鍵，釋放高效的?過敏性毒素C5a?(74個氨基酸) 并激活C5b。這是C5b-9復合物組裝過程中唯一的蛋白?水解步驟。C5b是不穩(wěn)定的，但它仍然與激活復合物結合短暫的時間?(~2分鐘) ，在?此期間，它要么與周圍液體中的一個C6結合形成C5b，6，要么衰變并聚集，不再能夠?形成MAC。C5b，6復合物也可能繼續(xù)與C3/C5轉化酶結合，其中單個C7的結合暴露了一?個膜結合區(qū)域，而C5b，6,7可以部分插入靶細胞的膽脂層。到目前為止，該復合物可?能會從目標細胞擴散出去，進入附近細胞的細胞膜。這被稱為旁觀者裂解或“反應性?裂解”?，可以是一個重要的病理來源。每個C5b-7復合物都可以結合一個C8蛋白分子?，從而使該復合物更牢固地插入到細胞膜中。這個復合物與C9結合，每個結合的C9可?以結合另一個C9，起始形成一個包含多達18個C9分子的環(huán)狀結構(Podack，E。???????R.?(1984)).具有一個或多個C9的C5b-9復合物被稱為補體的膜攻擊復合物 (MAC) 。??并不是所有的C5b-8配合物都有完整的C9環(huán)，平均每個C5b-8配合物只有3個C9。C9的?完整的蛋白環(huán)形成了電子顯微鏡上看到的孔，它們導致代謝物和小蛋白質泄漏出細胞?，以及水進入細胞。如果將足夠數量的水插入細胞膜，那么由于滲透壓，流入細胞的?水就會使細胞膜破裂，使目標細胞?(或一個旁觀者細胞) 的全部內容物被釋放出來。?任何一種過程都可能導致細胞死亡。最初人們認為每個細胞只需要一個C5b-9復合物(?被稱為裂解的“一打擊理論”(隆美爾F。A.和梅耶爾，M.M.?(1973) )，但這可能是不正確的。例如，一個紅細胞需要大約850個C5b-9?復合物，通過C7分子的數量來衡量，才能發(fā)生裂解(Bauer，J。以及其他人?????(1979)).受CD59保護的抗MAC的宿主細胞需要足夠數量的C5b-9來捆綁所有的CD59?，然后再捆綁大約850個C5b-9。有核細胞的裂解需要更多的C5b-9復合物，因為?它們的大小和在這些細胞中存在多種防御機制。

物理特性和結構

分子量：??190,000?Da，由兩個二硫鍵連接鏈組成。阿爾法鏈是?115,000?Da?，?貝塔鏈是75,000?Da?。阿爾法鏈和阿爾法鏈是通過一個二硫鍵連接起來的。C5 的 pI為4.7到5.5。

C3/C5轉化酶切割C5，從alpha鏈的n端釋放C5a?( 一個74個氨基酸片段，8268?Da去糖基化，10400+1000糖基化) 。C5b片段?(181,000?Da) 與C6結合，啟動膜攻擊?復合物的自發(fā)組裝。

CAS編號：80295-53-0

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測定

C5最簡單的檢測方法是使用C5耗盡的人血清，并測量EA?(經典途徑) 或Er?(替?代途徑) 的裂解，作為添加的測試樣品或標準純化C5濃度的函數。每個獨特的應用程?序都可能需要確定適當的條件。然而，一個典型的檢測方法包括在濕冰上混合25μL ?C5-Dpl，含c5的樣品用GVB++稀釋到1到10?ng?C5，以及足夠的GVB++使體積達到300μL?。EA?(3?X?107最后加入200μL)。純化的C5或正常的人血清 (NHS) 可作為C5的來源。?將反應混合物在37個條件下孵育30?mino加入C和1?mL的冷GVBE。然后混合反應并離心?，旋轉未裂解的細胞。然后在415?nm處分析上清液中釋放的血紅蛋白，并與不含C5的?空白細胞?(背景裂解對照) 和用275μL水代替GVB++和25μL?C5-Dpl?(100%裂解對照)??進行比較。

許多其他的檢測方法已經被描述為使用EA預加載C1 (EAC1細胞) 或預加載經典?途徑C5轉化酶 (EAC1423細胞) 。然而，所有這些檢測方法都需要使用多種純化的補?體成分或更難以制備的試劑(Dodds，A。W.和Sim，R。B. (1997) ；摩根，B。P. (2?000)

參考文獻

Bauer, J., Podack, E.R. and Valet, G. (1979) Determination of the number of lytic sites in biconcave and spheroid erythrocyte ghosts after complement lysis. J. Immunol. 122:2032-2036.

Dodds, A.W. and Sim, R.B. editors (1997) Complement. A Practical Approach (ISBN 019963539) Oxford University Press, Oxford.