垂體功能減退癥動物模型【實驗外包】

【造模機制】采用手術(shù)去除腺垂體或神經(jīng)垂體的方法導(dǎo)致相應(yīng)垂體激素斷絕,引起類似人類垂體功能減退癥的表現(xiàn)。

【造模方法】采用咽旁手術(shù)法切除垂體造模選用 Wistar 大鼠,雌性,180～200g。手術(shù)前 30 分鐘腹腔注射阿托品 4mg/kg,地西泮(安定)2.5mg/kg,10%水合氯醛 400mg/kg腹腔麻醉。將大鼠仰臥固定于動物立體定向架上,頸部正中作 4cm 切口。顯微鏡下沿中線分離淋巴結(jié),涎腺,暴露出胸骨舌骨肌,肩胛舌骨肌,中線分離胸骨舌骨肌后可見其下的甲狀腺和氣管。在甲狀腺尾側(cè) 1cm 兩氣管環(huán)間橫向切開一小口,氣管頭側(cè)以小棉片填塞,以防咽部分泌物進入氣管。用外徑 0.2cm 的 Teflon 套管插入氣管尾側(cè)。在氣管左側(cè)胸骨舌骨肌分離。抬起舌骨可見椎前肌止于基蝶骨和比骨交界的軟骨連合處。以鏡下藍色的基蝶竇肌,二腹肌肌腱內(nèi)側(cè)間分離,電囊一分支到食管和咽部的小動脈后,仔細將食管后擔(dān)與椎前為前界,其探方為下丘腦;向后至軟骨連合后方 1～2mm;向兩側(cè)分離至顳骨蛟泡的前內(nèi)側(cè)即尖部。直徑 1mm 的顯徹磨鉆首先磨除兩鼓泡前內(nèi)側(cè),鉆孔時注意保留最內(nèi)面一薄層骨片。按此方法充分磨除所暴露術(shù)野的骨質(zhì)。自制 90°彎鉤和精細顯微鍛配合取出薄層骨片,此時可見蔽底硬腦膜及膜下略帶紅色的腦垂體。用小鉤、顯微鑷“十”形切開硬腦膜,由于腦壓的作用垂體向術(shù)野突出。暴露充分時可見兩側(cè)的海綿簍,腺垂體和神經(jīng)垂體之間稍加分離即可完整摘除腺垂體。術(shù)區(qū)用明膠海綿壓追止血、填塞后,拔除氣管插管,取出氣管內(nèi)填塞棉片,吸除分泌物,再將氣管插管向氣瞥頭端插入從口引出,近心端插入氣管切口3mm 左右,縫合。頸部皮膚及皮下組織分層縫合,關(guān)閉切口。術(shù)后 3 天內(nèi)常規(guī)腹腔注射地塞米松 1mg,慶大霉素 4×10'U,氫化可的松加到 10％葡萄糖鹽水中(濃度 10mg/L),作為飲水給大鼠喝。飼以高蛋白精飼料。

觀察指標(biāo):定期測量體重、所切除的組織、靶腺如甲狀腺、性腺、腎上腺等分別以4%多聚甲醛、2.5％戊二醛固定,作光鏡切片和透射電鏡切片。術(shù)前及術(shù)后處死時采血,制備血滑,測定血清腺垂體激素及靶腺激素如卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、PRL、促甲狀腺激素(TSH)、生長激素(GH)、甲狀腺素(Ti)等。

【模型特點】

1.大鼠術(shù)后出現(xiàn)少動、食欲下降,消瘦,精神委靡、易感染、體毛易脫落等癥狀。而正常大鼠術(shù)后 1 周可恢復(fù)正常。

2.模型大鼠成活率約為 70%左右。由于呼吸道梗阻、感染、急性垂體功能不全、惡病質(zhì)等原因可導(dǎo)致部分動物在術(shù)后 2 周內(nèi)發(fā)生死亡。因此,應(yīng)加強術(shù)后護理。

3.切除組織的光鏡和電鏡檢查可驗證手術(shù)是否成功。其他靶腺病理學(xué)檢查可見:術(shù)后2 周即見靶腺退化,1個月時更明顯。光鏡觀察:甲狀腺濾泡上皮細胞由立方形變成扁平形，濾泡腔擴大。曲細精管壁上皮細胞層次減少。各級精母細胞、精子細胞和精子少見。卵泡發(fā)育受阻,各級卵泡少見。電鏡觀察:甲狀腺濾泡上皮細胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴大,數(shù)量減少、線粒體腫脹、腔面微絨毛減少。精原細胞線粒體腫脹,精母細胞及間質(zhì)細胞內(nèi)脂滴堆積。閉鎖卵泡增多,卵細胞消失,有透明帶消失和顆粒細胞壞死現(xiàn)象。

4.血清腺垂體激素,靶腺激素明顯下降,與術(shù)前比較有顯著性差別。

5.術(shù)后 3 天,模型大鼠體重下降,2 周后體重?；謴?fù)正常。常以術(shù)后 14 天體重凈增減值作為模型成功與否的篩選指標(biāo)。一般選擇 2 周后體重?zé)o增加且此后體重增加小于每日1g 的為成功去垂體鼠。

【應(yīng)用范圍】本模型除可用于垂體功能減退癥研究外,還可用于下丘腦功能、垂體激素功能、神經(jīng)內(nèi)分泌、垂體移植、外源性垂體激素活性觀察等研究。

【注意事項】

1.術(shù)中應(yīng)充分暴露垂體鞍底,利于游離腺垂體,分塊切除,否則可導(dǎo)致殘留部分腺垂體。

2.嚙齒類動物的激索檢測所用試劑少且價格昂貴,因此,無論全切除整個垂體,或者僅切除腺垂體,最常用、最簡便的評價指標(biāo)是體重。術(shù)后 14 天體重凈增減值作為模型評價指標(biāo)應(yīng)結(jié)合考慮前 1 周和后 1 周體重增減情況。體重增長過快者疑為有殘留部分垂體組織。而體重呈負增長的大鼠體質(zhì)較差,應(yīng)考慮是否適合實驗利用。

【模型評估】本模型的建立有手術(shù)方法簡單、易于掌握、垂體切除可靠、對動物創(chuàng)傷小等優(yōu)點。去垂體的方法有手術(shù)和化學(xué)法?；瘜W(xué)法去垂體是通過特定藥物造成垂體某一方面功能的抑制狀態(tài),因而受到其可靠性的影響而應(yīng)用范圍較小。去垂體手術(shù)分為經(jīng)顳側(cè)途徑、耳道途徑和咽旁途徑等幾種,最常用的是咽旁途徑。經(jīng)耳立體定向去除垂體有動物成活率高的優(yōu)點,但成功率較咽旁途徑低。大鼠腺垂體和神經(jīng)垂體間無中間葉的存在,腺垂體、神經(jīng)垂體界限明顯,較易分離,神經(jīng)垂體位于腺垂體中間部分的后上方,呈腺垂體包繞神經(jīng)垂體之勢,腺垂體的前后方薄,以兩側(cè)為主,兩側(cè)方大致呈三棱錐形,尖端向前。術(shù)中鞍底暴露充分時,由于腦壓的作用腺垂體常自動突出術(shù)野,因此,能做到大鼠腺垂體的全切。

本模型可選擇性切除腺垂體或神經(jīng)垂體及全部垂體。神經(jīng)垂體的保留可使動物免除出現(xiàn)尿崩、內(nèi)環(huán)境紊亂等后遺癥,從而提高了動物模型的生存率,也排除了對腺垂體功能減退研究的干擾。

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