siRNA和shRNA作用原理

shRNA和siRNA都是通過RNAi途徑介導基因的沉默，但兩者轉(zhuǎn)染媒介、構(gòu)建方式和細胞內(nèi)加工過程不完全相同。

siRNA可以在體外合成后通過轉(zhuǎn)染進入細胞，也可以將其dsRNA前體轉(zhuǎn)染入細胞，dsRNA在細胞質(zhì)內(nèi)經(jīng)過一系列酶處理，形成siRNA，之后siRNA與RISC結(jié)合并介導RISC與靶mRNA結(jié)合，導致靶mRNA的切割和降解。

shRNA則需構(gòu)建至表達載體中，利用質(zhì)?；虿《久浇檫M入細胞，在細胞核內(nèi)通過轉(zhuǎn)錄和剪切形成，之后shRNA轉(zhuǎn)運出細胞核，在細胞質(zhì)內(nèi)經(jīng)過Dicer酶處理后形成siRNA，進而導致靶mRNA的切割和降解。

siRNA和shRNA的區(qū)別

1. shRNA具有更長的作用時效：siRNA的穩(wěn)定性較低，進入細胞后會逐漸被降解，因此只能在短期內(nèi)（一周左右）實現(xiàn)對靶基因的沉默；shRNA借助表達載體可以在細胞內(nèi)大量轉(zhuǎn)錄，因此靶基因的沉默時效更長，可以持續(xù)數(shù)個星期。

2. shRNA對于難轉(zhuǎn)染的細胞效果更好：siRNA主要通過轉(zhuǎn)染進入細胞，難轉(zhuǎn)染的細胞會嚴重影響siRNA的功能；shRNA可借助病毒導入細胞，對于難轉(zhuǎn)染的細胞仍然有很高的導入效率，因此對于難轉(zhuǎn)染的細胞干擾效果更好。

3. shRNA脫靶率更低：有證據(jù)表明shRNA的脫靶更低，可能是由于siRNA在細胞質(zhì)中逐漸降解導致脫靶。